新型抗結(jié)核先導(dǎo)化合物及其藥靶的研究與發(fā)現(xiàn).pdf

1、根據(jù)WHO報(bào)道，全球每年約有800萬新增結(jié)核(TB)病例發(fā)生，至少有300萬人死于該病，約三分之一人口感染過結(jié)核分枝桿菌。近年來引起TB發(fā)病率上升的原因之一是大量耐藥結(jié)核菌的出現(xiàn)，特別是多重耐藥結(jié)核(MDR-TB，至少對(duì)兩種抗結(jié)核一線藥物異煙肼及利福平耐藥)令人警惕的增長(zhǎng)，成為近年來控制結(jié)核病的巨大威脅，已經(jīng)引起世界各國(guó)的極度關(guān)注。目前，抗結(jié)核治療主要依靠WHO推薦DOTS方案，即INH、RIF、PZA和EMB4種藥聯(lián)合進(jìn)行治療2個(gè)月，

2、再使用INH與RIF連續(xù)治療4個(gè)月。雖然DOTS對(duì)控制TB發(fā)揮了重要作用，但在一些有MDR-TB高發(fā)病率的地區(qū)，DOTS并不能控制病情，且這一方法至少需要6個(gè)月的療程，較長(zhǎng)的時(shí)間跨度很難使病人依從，并且成為抗藥結(jié)核菌株的來源，這對(duì)于全球現(xiàn)有的結(jié)核病防治規(guī)劃構(gòu)成嚴(yán)重的威脅。因此，迫切需要開發(fā)新型抗結(jié)核治療藥物來解決日益增多的耐多藥結(jié)核分枝桿菌問題。
　　 本課題組基于化合物庫高通量篩選出的一種新型化合物S28，在體外抑菌試驗(yàn)中取得

3、了明顯的抑菌效果，并可以有效地抑制臨床分離的耐藥菌株的生長(zhǎng)，然而其可能的作用機(jī)制及靶標(biāo)還不甚清楚。本研究利用雙向電泳技術(shù)2-DE結(jié)合基質(zhì)輔助激光解吸，電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(MALDI-TOF-MS)，應(yīng)用比較蛋白質(zhì)組學(xué)的方法來研究S28對(duì)結(jié)核分枝桿菌H37Ra作用前后的蛋白表達(dá)差異，為進(jìn)一步研究活性化合物的作用機(jī)制提供線索。通過采用雙向電泳技術(shù)比較分析活性化合物作用結(jié)核分枝桿菌H37Ra前后的全細(xì)胞蛋白表達(dá)差異，我們發(fā)現(xiàn)13個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)

4、表達(dá)下調(diào)，對(duì)其中6個(gè)改變明顯的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解吸，電離飛行時(shí)間質(zhì)譜分析，成功測(cè)定3個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)。數(shù)據(jù)庫檢索分析確定這3個(gè)差異蛋白點(diǎn)分別為延長(zhǎng)因子Tu、短鏈脫氫酶以及保守蛋白R(shí)v2626c，是參與蛋白質(zhì)翻譯和氧化呼吸、能量代謝等生理過程的重要蛋白。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為進(jìn)一步深入探索新型抗結(jié)核活性化合物的作用機(jī)制和可能的靶點(diǎn)提供研究基礎(chǔ)和方向。其中Rv2626c為低氧反應(yīng)蛋白家族成員(Hypoxia Response Protein Fa