miRNA-221-222對非小細胞肺癌增殖作用的研究.pdf

1、非小細胞肺癌是一種常見的肺部惡性腫瘤，在全世界范圍內，其發(fā)病率與死亡率在各種惡性腫瘤中均位居前列。然而，非小細胞肺癌發(fā)生的分子機制目前尚不清楚，對它的預防和治療仍然缺乏有效的手段。因此，深入探究其潛在的分子機制顯得尤為重要。微小RNA（microRNA，miRNA）已被證實參與非小細胞肺癌的發(fā)生與發(fā)展過程，大量的前期研究顯示，微小RNA221/222（miR-221/222）在非小細胞肺癌組織中表達升高。在人類非小細胞肺癌細胞系 H46

2、0細胞中，通過轉染微小 RNA-221和微小RNA-222的模擬物以及抑制物模擬其在H460細胞中表達上調和下調以及之后進行的臨床非小細胞肺癌患者癌組織及癌旁組織中微小RNA-221表達水平的研究，揭示miR-221和miR-222在調控人類非小細胞肺癌中的作用和潛在的分子機制。
　　本研究中通過體外轉染miR-221和miR-222模擬物（mimics）以及miR-221和miR-222抑制物（inhibitors），使miR-

3、221和miR-222在人類非小細胞肺癌H460細胞中的表升高（mimics組）或者降低（inhibitors組），并通過CCK-8以及EdU染色檢測細胞活力及增殖情況的改變；通過生物信息學數(shù)據庫預測miR-221和miR-222的潛在靶基因，并檢測miR-221/222模擬物及抑制物對其潛在靶基因蛋白水平表達的影響，從而初步揭示miR-221和miR-222在人類非小細胞肺癌H460細胞中的潛在靶基因；應用實時熒光定量反轉錄聚合酶鏈反

4、應（RT-PCR）Taqman MGB探針法檢測40例非小細胞肺癌患者癌組織及癌旁組織中 miR-221的表達水平，以看家基因U6snRNA為內參，進行熒光定量PCR檢測，統(tǒng)計分析表達水平的差異；通過蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測p27蛋白在臨床非小細胞肺癌癌組織及癌旁組織中的表達差異。
　　以上實驗結果表明，與對照組相比，在H460細胞中轉染miR-221和miR-222模擬物48h后，其細胞活力和增殖能力均顯著

5、增加，同時H460細胞內p27在蛋白水平的表達顯著降低。相反地，和對照組相比，在H460細胞中轉染miR-221和miR-222抑制物48h后，H460細胞活力及增殖能力均顯著降低，同時H460細胞內p27的蛋白水平的表達顯著增加。組織水平上，miR221在非小細胞肺癌癌組織的表達水平較癌旁組織高且具有統(tǒng)計學意義（P＜0.0001）。不同臨床病例特征組間 miRNA-221表達水平女性（31.55±17.74）比男性（11.34±8.3

6、9）高，無吸煙史（25.76±17.73）比有吸煙史者（10.81±8.09）高，腺癌（20.54±15.71）比鱗癌（7.402±7.85）高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），與患者影像學分型、腫瘤大小、淋巴轉移、組織學類型無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。p27在臨床非小細胞肺癌癌組織中的蛋白表達水平較對照組顯著下調（P＜0.05）。
　　通過本研究我們得出以下結論： miR-221和miR-222可促進人類非小細胞肺癌細胞系H