Poly(I-C)激活Toll樣受體3促進(jìn)小鼠皮膚傷口愈合的研究.pdf

1、皮膚傷口修復(fù)一個復(fù)雜的病理生理過程，由多種分子和細(xì)胞共同參與，包括炎癥反應(yīng)期、增生期、塑型期三個階段。Toll樣受體家族(toll like receptors，TLRs)是存在于哺乳動物中的一種模式識別受體(pattern recognition receptor，PRRs)，通過鑒別病源相關(guān)模式(pathogen associated molecular pattem，PAMPs)識別病原體，形成機(jī)體免疫的第一條防線。其中TLR3可

2、以識別病毒產(chǎn)生的雙鏈RNA，從而誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。Poly(I:C)作為一種人工合成的雙鏈RNA，是TLR3的激動劑。在臨床上Poly(I:C)常用于治療病毒性肝炎，然而近年來臨床和實(shí)驗(yàn)中均發(fā)現(xiàn)它能夠促進(jìn)皮膚傷口愈合，但其中具體的分子機(jī)制仍不清楚。本課題應(yīng)用野生型小鼠傷口和TLR3基因敲除小鼠傷口兩種動物模型，探討Poly(I:C)促進(jìn)傷口修復(fù)的相關(guān)機(jī)制及對TLR3受體的作用。
　　研究目的：
　　探究Poly(I:C)

3、對傷口愈合的作用，檢測TLR3受體和TGF-β/Smad3信號通路是否參與其中，以及Poly(I:C)能否影響α-SMA和Collagen I的表達(dá)。
　　研究方法：
　　在小鼠背部兩側(cè)分別建立皮膚傷口模型，通過給予 Poly(I:C)（處理組）和PBS（對照組），觀察小鼠傷口愈合情況，采集圖片評價傷口愈合率。傷口及邊緣組織mRNA及蛋白提取后，應(yīng)用RT-PCR檢測TGF-β/Smad3通路、α-SMA和Collagen I

4、的基因表達(dá)水平；Western Blot檢測TGF-β/Smad3通路、α-SMA和Collagen I的蛋白表達(dá)水平；ELISA測定組織中TGF-β蛋白水平的變化；傷口皮膚組織固定后經(jīng)Masson染色、HE染色，觀察傷口膠原蛋白的增殖情況以及肉芽組織與新生血管的形成情況。
　　研究結(jié)果：
　　1、Poly(I:C)對野生型小鼠皮膚傷口的愈合作用
　　建立C57BL/6小鼠皮膚傷口模型，經(jīng)Poly(I:C)或PBS處理

5、后，處理組皮膚傷口愈合的時間為10天，對照組為12天。組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，Poly(I:C)處理后膠原蛋白含量增多，肉芽組織生成較對照組增加，再上皮化更明顯。傷口局部TGF-β/Smad3通路、α-SMA及Collagen I基因與蛋白表達(dá)量均增加。
　　2、Poly(I:C)對TLR3基因敲除小鼠皮膚傷口的愈合作用
　　建立TLR3基因敲除小鼠皮膚傷口模型，經(jīng)Poly(I:C)或PBS處理后，處理組與對照組皮膚傷口愈合的時間均

6、為12天, Poly(I:C)對TLR3基因敲除小鼠的皮膚傷口愈合時間沒有影響。組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，處理組與對照組的膠原蛋白含量及肉芽組織的形成十分相近。處理組傷口局部TGF-β/Smad3通路、α-SMA及Collagen I基因及蛋白表達(dá)量與對照組基本一致。
　　研究結(jié)論：
　　Poly(I:C)是通過激活TLR3受體發(fā)揮促進(jìn)創(chuàng)傷修復(fù)的作用。Poly(I:C)激活TLR3受體后增加I型膠原的合成，上調(diào)α-SMA的表達(dá)促進(jìn)皮膚