墨西哥黃唇魚膠原肽促進小鼠皮膚傷口愈合作用的研究.pdf

1、以人工增殖放流的墨西哥黃唇魚（加利福尼亞灣石首魚）肉為原料，經(jīng)復合酶解得到墨西哥黃唇魚膠原肽(Totoaba macdonaldi-meat collagen peptides，TMCP)，圍繞其促進皮膚傷口愈合的性能及可能的生物學機制，分別從體外細胞水平和整體動物水平進行研究。主要研究內(nèi)容及結(jié)果匯總?cè)缦?
　　(1)TMCP的酶法制備:以墨西哥黃唇魚肉為原料，采用復合酶法(Alcalase堿性蛋白酶、Flavourzyme復合風

2、味蛋白酶)，以水解度(DH)為響應值，在單因素試驗的基礎上進行四因素三水平的響應面分析，得到的優(yōu)化工藝參數(shù)為:酶解溫度55℃、水解時間4h、體系pH7.0、酶總用量1.0％，該條件下實際測得DH為63.90％。采用Waters凝膠色譜法測得該TMCP平均分子量(Mw)為837Da，由5～8個氨基酸組成;采用日立全自動氨基酸分析儀從中檢測出22種氨基酸，其中富含羥脯氨酸(1.24％)、γ-氨基丁酸(1.03％)、?；撬?0.74％)和鳥氨

3、酸(0.37％)，具有高的營養(yǎng)和醫(yī)用保健價值。
　　(2)體外細胞水平試驗:探究TMCP對成纖維細胞株NIH/3T3增殖、遷移及膠原合成的影響。采用CCK8法測定，顯示TMCP能促進NIH/3T3細胞的增殖，在所試濃度范圍(25～100μg/mL)內(nèi)，TMCP對細胞增殖率的促進作用和對羥脯氨酸含量的提升效果都極顯著地高于對照組(p＜0.01)，與陽性對照藥物(bFGF)相當;當試樣濃度為50μg/mL時，表現(xiàn)出最佳效果。選擇該TM

4、CP濃度進行細胞劃痕實驗，經(jīng)36h全程監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，試驗組自12h起，與對照組相比，極顯著地提高了細胞的遷移率(p＜0.01)，與bFGF效果相當。
　　(3)整體動物試驗:采用小鼠皮膚皮膚創(chuàng)傷模型，對40只健康雄性ICR小鼠進行切除型傷口造模處理，造模后次日起分別用低、中、高三個劑量的TMCP(0.66、1.33、2.0g/kg·bw)和等體積的去離子水（空白對照）連續(xù)灌胃14d，每隔2d測定傷口愈合率。分別于造模后的第7d和第14

5、d分批處死動物，取傷口邊緣的皮膚組織，經(jīng)HE染色和Masson染色進行組織學觀察，并測定羥脯氨酸含量和進行免疫組化分析。結(jié)果表明，在第7d、14d時，TMCP中、高劑量組在傷口愈合率、膠原含量、血管內(nèi)皮生長因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)及堿性成纖維細胞生長因子(Basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)表達量等指標上均極顯著優(yōu)于對照組(p＜0.01);