CaSGT1和CaSRC2-1互作及其在PcINF1-CaSRC2-1激活辣椒免疫反應(yīng)中的作用分析.pdf

1、前期本實(shí)驗(yàn)室從辣椒疫霉 cDNA文庫中分離獲得了一個(gè) elicitin家族成員PcINF1的全長cDNA，發(fā)現(xiàn)該蛋白可與辣椒SRC2-1蛋白結(jié)合，促發(fā)辣椒葉片產(chǎn)生HR（hypersensitive response）細(xì)胞壞死，并使辣椒防御反應(yīng)相關(guān)標(biāo)記基因上調(diào)，但是其內(nèi)在機(jī)制并不清楚。
　　本研究在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn) CaSGT1參與 PcINF1/CaSRC2-1誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)：通過酵母雙雜交系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)CaSRC2-1與CaSG

2、T1之間存在互作，并進(jìn)一步通過雙分子熒光互補(bǔ)（BiFC）和免疫共沉淀分析（co-IP）得到證實(shí)。在辣椒植株葉片上接種疫霉，或同時(shí)瞬間表達(dá) PcINF1/CaSRC2-1可使 CaSGT1的轉(zhuǎn)錄表達(dá)顯著上調(diào)，病毒介導(dǎo) CaSGT1沉默（CaSGT1-VIGS）可顯著降低PcINF1/CaSRC2-1瞬間表達(dá)激活的辣椒葉片細(xì)胞 HR壞死、H2O2積累、防御反應(yīng)相關(guān)標(biāo)記基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的上調(diào)，且CaSGT1和CaSRC2-1共同沉默比其中任何一個(gè)

3、基因單獨(dú)沉默更能降低接種疫霉導(dǎo)致的HR細(xì)胞壞死和防御反應(yīng)相關(guān)基因表達(dá)。此外，還發(fā)現(xiàn)CaSGT1和CaSRC2-1沉默能降低彼此瞬間表達(dá)激活的HR反應(yīng)，表明在辣椒免疫反應(yīng)中CaSGT1和CaSRC2-1之間功能上相互依賴。尤其重要的是，我們還發(fā)現(xiàn)PcINF1的瞬間超表達(dá)、疫霉接種均可顯著增強(qiáng)CaSGT1和CaSRC2-1之間的互作，另一方面，CaSGT1沉默則導(dǎo)致PcINF1和CaSRC2-1之間的互作明顯減弱。
　　上述結(jié)果表明，