自噬性心肌保護(hù)中基于Notch1信號相關(guān)miRNA和lncRNA的篩選.pdf

1、急性心肌梗塞在心血管疾病中發(fā)病率和死亡率極高，缺血/再灌注損傷仍是急性心肌梗塞臨床治療中面臨的難題。如何減輕缺血/再灌注損傷是心肌損傷與保護(hù)的研究熱點(diǎn)。研究心肌損傷發(fā)生機(jī)制，將有助于為臨床防治心肌缺血損傷提供理論和實(shí)踐依據(jù)。因此，基于 lncRNA-miRNA-Notch1調(diào)控假說，建立心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷及自噬保護(hù)模型，通過高通量測序技術(shù)及生物信息學(xué)比較分析，篩選出在自噬保護(hù)中具有調(diào)控 Notch1蛋白作用的 miRNA，以及具有調(diào)

2、控該 miRNA的 lncRNA，為研究 Notch1信號通路在自噬性心肌保護(hù)的分子機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。
　　第1章Notch1信號通路增強(qiáng)自噬對抗心肌缺氧復(fù)氧損傷的保護(hù)作用
　　目的：篩選有效調(diào)控自噬的3-MA及RAPA試劑濃度，以及探討Notch1信號通路在自噬對抗心肌缺氧復(fù)氧損傷中的作用。
　　方法：建立心肌細(xì)胞損傷模型，給予3-MA、RAPA干預(yù)，檢測細(xì)胞活力，篩選3-MA及RAPA有效試劑濃度；利用Ad-N1I

3、CD及Ad-N1ICD-shRNA干預(yù)Notch1信號通路，檢測H/R損傷中心肌細(xì)胞活力情況。
　　結(jié)果：本研究中3-MA和 RAPA最佳試劑濃度分別為1μM和50nM；Notch1過表達(dá)可提高 H/R的心肌細(xì)胞活力，干擾 Notch1可明顯降低H/R心肌細(xì)胞活力；3-MA加入Notch1過表達(dá)組中，H/R的心肌細(xì)胞活力再次降低，RAPA加入 Notch1干擾組中，H/R的心肌細(xì)胞活力恢復(fù)。
　　結(jié)論：Notch1信號通路可

4、增強(qiáng)自噬對抗心肌缺氧復(fù)氧損傷發(fā)揮保護(hù)作用。
　　第2章高通量測序及生物信息學(xué)篩選自噬性心肌保護(hù)中Notch1信號通路相關(guān)miRNA及l(fā)ncRNA
　　目的：借助高通量測序及生物信息學(xué)比較分析篩選在自噬性心肌保護(hù)中具有調(diào)控Notch1信號通路的關(guān)鍵miRNA及l(fā)ncRNA。
　　方法：提取心肌缺氧/復(fù)氧損傷中的總 RNA，借助高通量測序及生物信息學(xué)分析系統(tǒng)，篩選具有差異表達(dá)的miRNA及l(fā)ncRNA。
　　結(jié)果：篩

5、選出了可能調(diào)控 Notch1基因表達(dá)的 miR-702-5p、miR-344g、miR-323-5p、miR-6334、miR-5132-5p、miR-15b-5p、miR-3562；生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn) lncRNA-4321可與 miR-702-5p直接結(jié)合并影響其活性；在 RAPA和3-MA處理心肌細(xì)胞中，Realtime-PCR檢測顯示 lncRNA-4321表達(dá)量與心肌自噬成正比，miR-702-5p表達(dá)量與心肌自噬成反比。