抗水稻黃單胞菌深海獨(dú)島枝芽胞桿菌A493及其活性物質(zhì)研究.pdf

1、人們已經(jīng)對(duì)陸地微生物活性次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行了廣泛的研究，而對(duì)海洋微生物相關(guān)方面的研究還比較欠缺。相對(duì)于陸地微生物，海洋微生物生活在非常特殊的環(huán)境中，其代謝產(chǎn)物的多樣性和代謝途徑的獨(dú)特性決定了海洋微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物具有新穎的結(jié)構(gòu)和特異的生物活性。本研究從海洋微生物中篩選具有抗植物病原菌作用的菌株，并對(duì)其中一株深海獨(dú)島枝芽胞桿菌（Vrgibacillus dokdonensis進(jìn)行抗菌化合物分離鑒定研究工作。
　　 以水稻黃單胞菌等為

2、指示菌，采用平板對(duì)峙法對(duì)411株海洋細(xì)菌進(jìn)行了抗菌篩選，初篩獲得具有抗菌活性的海洋菌株81株，復(fù)篩獲得具有穩(wěn)定抗菌活性的菌株7株，最后通過(guò)測(cè)定抗菌譜，得到一株抗菌譜特異并且穩(wěn)定拮抗水稻黃單胞菌的深海獨(dú)島枝芽胞桿菌（V.dokdonensis A493）。
　　 A493產(chǎn)抗菌活性物質(zhì)可以耐受100℃的高溫，在pH4-10和紫外照射環(huán)境中活性穩(wěn)定，可以通過(guò)3kDa的超濾管，并且對(duì)蛋白酶不敏感。該物質(zhì)具有很強(qiáng)的極性，只能溶解在水和甲

3、醇中。酸沉淀和硫酸銨沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果排除了活性物質(zhì)是脂肽類(lèi)物質(zhì)的可能性。
　　 通過(guò)離子交換色譜法提取，再經(jīng)兩次薄層層析硅膠板回收分離，得到了精制樣品。經(jīng)過(guò)LC-MS分析，初步判斷活性物質(zhì)分子量為317Da;經(jīng)Doskochilova溶劑系統(tǒng)紙層析驗(yàn)證，該物質(zhì)與鏈霉素的紙層析圖譜極為相近；其紫外吸收為末端吸收，茚三酮顯色法顯示黃色。一般氨基糖苷類(lèi)物質(zhì)分子量是大于400Da的，結(jié)合該物質(zhì)抗菌譜的特異性和產(chǎn)生菌分離環(huán)境的特殊性，表明該活

4、性物質(zhì)極有可能是一種新型的氨基糖苷類(lèi)抗生素，初步命名為ZH-11。
　　 對(duì)A493產(chǎn)活性物質(zhì)ZH-11發(fā)酵條件進(jìn)行了初步優(yōu)化，使其單位體積發(fā)酵液抑菌效果提高18％?；钚晕镔|(zhì)ZH-11相對(duì)效價(jià)測(cè)定的實(shí)驗(yàn)表明，A493發(fā)酵無(wú)菌上清液對(duì)水稻黃單胞菌的抑菌效果相當(dāng)于15.6μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)鏈霉素。
　　 對(duì)水稻白葉枯病害的溫室實(shí)驗(yàn)表明，經(jīng)過(guò)A493無(wú)菌上清液處理，水稻生長(zhǎng)20d后對(duì)水稻白葉枯病害防治效果達(dá)到了66.7%，且對(duì)水