大鼠離斷肢體灌注保存及回植的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:減輕離斷肢體的因缺血缺氧造成的損害，保護(hù)組織活性，延長(zhǎng)回植手術(shù)時(shí)限，增加回植術(shù)后肢體的成活率和功能恢復(fù)。
　　方法:選取健康成年Wistar大鼠（雌性）90只(體重250-300g)。實(shí)驗(yàn)一大鼠離斷肢體不同灌注液一次性灌注保存效果的比較研究:選出40只大鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，即形成80只離斷肢體模型，第一組為UW液灌注組;第二組為HTK液灌注紐;第三組為生理鹽水灌注組;第四組為不灌注紐，作為對(duì)照。前三組離斷后肢后以12

2、ml/h速度灌注對(duì)應(yīng)灌注液1h。自離斷后將肢體放置在4℃的冰箱內(nèi)保存24h。收集不同時(shí)間點(diǎn)的肌肉組織進(jìn)行勻漿，勻漿液行ALP、ALT、AST、CK、LDH、GLU、LAC、SOD生化檢測(cè);同時(shí)在離斷6h、12h、18h、24h取肌肉組織行HE染色、PTAH染色和Bax蛋白免疫組化染色。于離斷12h、24h取肌肉組織標(biāo)本，透射電鏡檢查觀察其細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。實(shí)驗(yàn)二大鼠離斷肢體不同灌注液每隔12小時(shí)間斷灌注后低溫保存效果的比較研究:選出3

3、0只大鼠隨機(jī)分為3組，每組10只，即形成60支離斷肢體模型，第一組為UW液灌注組;第二紐為HTK液灌注組;第三組生理鹽水灌注組。各組于離斷后0h、12h以12ml/h速度分別灌注對(duì)應(yīng)灌注液1h。自離斷后將肢體放置在在4℃冰箱內(nèi)保存24h。收集不同時(shí)間點(diǎn)的肌肉組織進(jìn)行勻漿，勻漿液行ALP、ALT、AST、CK、LDH、GLU、LAC、SOD生化檢測(cè);同時(shí)在離斷6h、12h、18h、24h取肌肉組織行HE染色、PTAH染色和Bax蛋白免疫組

4、化染色，并統(tǒng)計(jì)細(xì)胞面積比例及免疫組化IOD值;于離斷12h、24h取肌肉組織標(biāo)本，透射電鏡檢查觀察其細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。實(shí)驗(yàn)三大鼠離斷肢體UW液灌注采用不同灌注方法保存效果的對(duì)比研究:統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)一UW液一次性灌注組和實(shí)驗(yàn)二UW液每隔12h間斷灌注組的結(jié)果。實(shí)驗(yàn)四大鼠離斷肢體UW灌注低溫保存后回植的比較研究:選出20只大鼠隨機(jī)分為2組-實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組10只，各組均行右后肢離斷手術(shù)，對(duì)照組正常結(jié)扎腹壁淺動(dòng)靜脈兩端并剪斷，實(shí)驗(yàn)組結(jié)扎腹

5、壁淺動(dòng)靜脈遠(yuǎn)端，并穿刺腹壁淺動(dòng)脈，從中緩慢灌注UW液至股靜脈、創(chuàng)面滲出清亮后，結(jié)扎腹壁淺近端。4℃冷藏離斷右后肢3h后行回植手術(shù)，觀察大鼠及其右后肢成活情況，行HE等檢測(cè)。
　　結(jié)果:實(shí)驗(yàn)一:隨離斷時(shí)間延長(zhǎng)，灌注組的ALP、ALT、AST、CK、LDH、LAC較不灌注組低，灌注組的GLU和SOD較不灌注組高。UW組各生化指標(biāo)與不灌注組各指標(biāo)間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其余組間部分指標(biāo)存在差異。各時(shí)間點(diǎn)，三個(gè)灌注組較不灌注紐組織HE染色、透射

6、電鏡病理變化輕微，灌注組中UW液組病理變化最輕。細(xì)胞面積比例各組間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，各時(shí)間點(diǎn)不灌注組的細(xì)胞面積比例最小，12h前生理鹽水組細(xì)胞面積比例最大，12h后UW液組細(xì)胞面積比例最大。免疫組化IOD:各組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)二:生化指標(biāo)間部分存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，UW液灌注組的ALP、ALT、AST、LDH、SOD較生理鹽水灌注組低。各時(shí)間點(diǎn)，UW液灌注組和HTK液灌注組病理變化相似，較生理鹽水灌注組病理變化輕。細(xì)胞面積比例

7、各組間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，各時(shí)間點(diǎn)生理鹽水組細(xì)胞面積比例最大。免疫組化IOD:各組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)三:UW液一次性灌注組和UW液間斷灌注組生化、細(xì)胞面積比例、免疫組化IOD無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，HE、PTAH及透射電鏡示病理變化類似。實(shí)驗(yàn)四:實(shí)驗(yàn)組成活率為60％，對(duì)照組僅為30％，且HE染色提示UW液灌注可以減少肌肉組織中缺血再灌注損傷。
　　結(jié)論:1、對(duì)離斷肢體行灌注4℃保存，可以有效的減輕組織因缺血缺氧造成的損害，效果強(qiáng)