骨橋蛋白通過MAPK信號通路上調(diào)MMP9表達(dá)及與胚胎著床相關(guān)性分析.pdf

1、目的：研究骨橋蛋白(OPN)在圍著床窗口期的小鼠子宮內(nèi)膜的變化規(guī)律，探討在人子宮內(nèi)膜腫瘤細(xì)胞RL95-2細(xì)胞（用來模擬著床期子宮內(nèi)膜細(xì)胞）中，OPN能否通過某一信號通路促進(jìn)MMP9的表達(dá)，分析在胚胎著床的過程中OPN所發(fā)揮的作用及機(jī)制。
　　 方法：(1)提取妊娠第1、2、3、4、5天(D1-D5)的小鼠的子宮內(nèi)膜上皮組織蛋白和mRNA，用Western blot方法和RT-PCR方法檢測OPN的表達(dá)的變化情況。(2)用重組的O

2、PN蛋白加入到無血清無雙抗條件的培養(yǎng)液中刺激RL95-2細(xì)胞，用ELISA方法檢測RL95-2細(xì)胞MMP9表達(dá)的變化情況和相應(yīng)通路的變化情況。(3)構(gòu)建攜帶有氨芐抗性表達(dá)基因和OPN變異體A（OPN全序列）的質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染入RL95-2細(xì)胞中，檢測轉(zhuǎn)染后培液中和RL95-2細(xì)胞中MMP9的蛋白和mRNA表達(dá)情況，分析相應(yīng)通路的變化情況
　　 結(jié)果：(1)妊娠期間小鼠子宮內(nèi)膜OPN的表達(dá)變化明顯，在妊娠D1-4天隨著妊娠天數(shù)的增加而增

3、加，在D4天小鼠胚胎著床窗口期表達(dá)達(dá)到最高峰，D5天表達(dá)量開始下降。(2)用OPN重組蛋白刺激RL95-2細(xì)胞后，MMP9的表達(dá)量明顯增加，并與OPN重組蛋白的加入量有著劑量依賴性，即隨著OPN重組蛋白加入量的增加而增加，并且OPN能夠通過ERK1/2的磷酸化而激活MAPK信號通路促使下游分子MMP9的表達(dá)上調(diào)，且OPN刺激ERK1/2的磷酸化隨著時間的增加而增加，在刺激1小時后達(dá)到最高值，但在2h時既開始下降。(3)OPN質(zhì)粒構(gòu)建成功