SENP1表達(dá)水平對(duì)人腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的作用機(jī)制及其相關(guān)性.pdf

1、目的：
　　人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤在所有原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中占比約32％，約占人類惡性腫瘤的81％左右，目前認(rèn)為起源于神經(jīng)外胚層，是迄今為止最為常見(jiàn)的顱內(nèi)惡性腫瘤。按照WHO2007年提出的病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，可以劃分為4個(gè)級(jí)別:Ⅰ級(jí)為毛細(xì)胞型星形膠質(zhì)瘤，占膠質(zhì)瘤的5％;Ⅱ級(jí)為擴(kuò)散型星形膠質(zhì)瘤，占膠質(zhì)瘤的30～40％;Ⅲ級(jí)為間變型星形膠質(zhì)瘤，約占15～25％，此級(jí)別腫瘤一般由Ⅱ級(jí)擴(kuò)散型星形膠質(zhì)瘤演變而來(lái);Ⅳ級(jí)為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，占顱內(nèi)膠質(zhì)瘤的3

2、0％左右。另外，有文獻(xiàn)發(fā)表相關(guān)報(bào)道，人類腦膠質(zhì)瘤目前的發(fā)病率為3.87人/10萬(wàn)人，在全身惡性腫瘤的發(fā)病中約占1％～3％，而接受手術(shù)、放療和化療的綜合治療后，患者的平均生存期也僅為8～11個(gè)月，由此推斷每年死于惡性腦膠質(zhì)瘤的患者不少于60萬(wàn)人，而且，此數(shù)目仍逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)。因此，人類腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤的研究已經(jīng)成為一個(gè)亟待解決的課題。隨著醫(yī)療領(lǐng)域的研究進(jìn)展，研究者在膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制方面的了解更為深入，并為研制新的腫瘤抑制藥物提供充足的理論基

3、礎(chǔ)。
　　通過(guò)對(duì)正常腦組織以及不同級(jí)別星形膠質(zhì)瘤組織中，SUMO特異性蛋白酶1(SENPl)的表達(dá)水平的檢測(cè)，分析其與病情進(jìn)展的相關(guān)性，采用RNA干擾技術(shù)敲減U251MG膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中SENPl的表達(dá)，研究其表達(dá)水平對(duì)U251細(xì)胞的增殖和凋亡的影響，以及可能存在的分子調(diào)控機(jī)制。
　　方法：
　　通過(guò)采用RT-qPCR和Western blotting兩種方法，檢測(cè)正常對(duì)照組(3例)和星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤組（28例）標(biāo)本中，S

4、ENP1在mRNA水平和蛋白水平上表達(dá)的差異性。
　　通過(guò)設(shè)計(jì)合成具有S ENP1特異性的siRNA，按照體積2ml、2.5×105個(gè)/孔，將U251MG細(xì)胞接種于6孔板之中，在接種12小時(shí)后轉(zhuǎn)染si-NC(正常對(duì)照組)、si-1、si-2(SENP1敲減組)，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90％以上后，轉(zhuǎn)染細(xì)胞然后繼續(xù)將其培養(yǎng)48小時(shí)，采用RT-qPCR和Western blotting方法來(lái)檢測(cè)SENP1在mRNA和蛋白水平上的表達(dá)的情況。

5、
　　與此同時(shí)，在膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251MG中沉默SENP1，在流式細(xì)胞儀上，通過(guò)對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞表面上的磷脂酰絲氨酸(PS)進(jìn)行檢測(cè)，以評(píng)估膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的數(shù)量。
　　最后，在U251MG細(xì)胞中將SENP1的表達(dá)敲減，再通過(guò)Westernblotting方法檢測(cè)胞內(nèi)的AKT的蛋白表達(dá)的情況及磷酸化的水平，以及該通路下游的靶因子p21，cyclinD1蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　通過(guò)對(duì)所收集的31例腦標(biāo)本組織進(jìn)行

6、RT-qPCR檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn):在人腦星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤中，SENP1的mRNA表達(dá)水平明顯高于正常腦組織（P＜0.05），并且隨腫瘤的惡性程度的增高表達(dá)水平亦增高，而且在高級(jí)別的星形細(xì)胞膠質(zhì)瘤（Ⅲ、Ⅳ級(jí)，WHO分級(jí)）中增高的水平更為顯著(P＜0.01);在蛋白水平上，通過(guò)Western blotting方法檢測(cè)，SENP1在正常組織和不同級(jí)別膠質(zhì)細(xì)胞瘤之間蛋白水平的差異性結(jié)果，與mRNA水平上的表達(dá)情況類似。
　　轉(zhuǎn)染SENPl siRN

7、A后，U251MG細(xì)胞中SENP1的mRNA水平上的表達(dá)受到抑制(P＜0.01)，蛋白水平上的表達(dá)也呈現(xiàn)降低。
　　細(xì)胞凋亡的分析結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染si-1、si-2(SENP1敲減組)的U251MG細(xì)胞，與si-NC(正常對(duì)照組)相比，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡數(shù)目明顯增加，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析凋亡率相對(duì)于正常對(duì)照組亦顯著增加(P＜0.05)，該結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　在U251MG細(xì)胞中敲減SENP1后，在蛋白水平上，通過(guò)Westernblot

8、ting實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)Akt、周期蛋白cyclinD1、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)的負(fù)性調(diào)節(jié)因子p21的表達(dá)情況，分析發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，Akt的磷酸化水平明顯降低且其下游靶因子cyclinD1的表達(dá)亦隨之降低，而其下游與細(xì)胞周期相關(guān)的p21蛋白的表達(dá)則隨之升高。
　　結(jié)論：
　　1、SENP1在人腦正常組織和不同級(jí)別膠質(zhì)瘤標(biāo)本中的表達(dá)差異與該類腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，可以作為臨床監(jiān)測(cè)以及預(yù)后評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)。