應(yīng)用病毒神經(jīng)束路示蹤技術(shù)研究-關(guān)元-穴針刺信號的傳導(dǎo)通路.pdf

1、目的:本文在針刺對“圍絕經(jīng)期綜合征”治療作用的中樞及外周機(jī)制的研究基礎(chǔ)上,以去卵巢大鼠為動物模型,應(yīng)用不同標(biāo)記的兩種偽狂犬病毒株(PRV)作為神經(jīng)示蹤劑,研究針刺信號從“關(guān)元”穴到中樞神經(jīng)系統(tǒng)的傳導(dǎo)通路,為中醫(yī)臨床應(yīng)用針刺“關(guān)元”穴治療女性生殖內(nèi)分泌疾病的機(jī)制提供現(xiàn)代神經(jīng)科學(xué)的實(shí)驗依據(jù)。
　　 方法:SD雌性大鼠(200-220g)隨機(jī)分為四組:正常組(INT),正常加電針組(INT+EA),去卵巢組(OVX)和去卵巢加電針組(

2、OVX+EA)。OVX和OVX+EA動物在乙醚麻醉下行雙側(cè)卵巢切除術(shù),術(shù)后與INT和INT+EA動物一起在相同條件下飼養(yǎng)四周。四組大鼠同時在“關(guān)元”穴注射10μl滴度為107 plaque-formingunits(PFU)/ml的偽狂犬病毒(分別為PRV-gG--LacZ+和PRV-gG--TK--EGFP)。INT+EA和OVX+EA組在注射病毒后30分鐘給予電針處理(連續(xù)波,刺激頻率2Hz,強(qiáng)度2-3mA),每天1次,每次30分鐘

3、,連續(xù)3天。每次電針處理后6小時,做陰道涂片觀察各組大鼠的陰道上皮細(xì)胞脫落情況。于第三次電針處理6小時后取血,用于血雌激素水平的測定,并灌流固定后取腦和脊髓,觀察PRV在各部位的分布和變化。
　　 結(jié)果:
　　 (一)OVX大鼠的陰道涂片只顯示有少量白細(xì)胞和無形態(tài)的上皮細(xì)胞碎片；電針處理后,陰道涂片中可重新出現(xiàn)成熟脫落上皮細(xì)胞；去卵巢后,大鼠外周E2的水平明顯降低；電針處理后血E2的水平比OVX組明顯升高(p<0.05)

4、；而INT+EA組與INT組相比無明顯變化。
　　 (二)用PRV-gG--LacZ+示蹤結(jié)果顯示:四組大鼠的脊髓、腦干、下丘腦以及大腦皮層均可觀察到PRV免疫陽性細(xì)胞。其主要分布為在脊髓的腰、胸、頸段的腹側(cè)和背側(cè)角,腦干孤束核、楔束核、巨細(xì)胞網(wǎng)狀核、迷走神經(jīng)背核、三叉神經(jīng)脊束核、中縫大核、藍(lán)斑、腦橋尾側(cè)網(wǎng)狀核、腦橋被蓋網(wǎng)狀核、小細(xì)胞網(wǎng)狀核、三叉神經(jīng)主核、三叉神經(jīng)中腦核、斜方體核、旁正中網(wǎng)狀核、外側(cè)網(wǎng)狀核、下橄欖核；丘腦腹側(cè)核、

5、中央灰質(zhì)、海馬、隔內(nèi)側(cè)核、下丘腦室旁核、視交叉部的弓狀核、下丘腦腹內(nèi)側(cè)核、斜角帶核、外側(cè)視前區(qū)等,以及皮層的紋狀區(qū)等部位；各核團(tuán)PRV-IR陽性細(xì)胞計數(shù)和統(tǒng)計結(jié)果表明,OVX組與神經(jīng)內(nèi)分泌密切相關(guān)的核團(tuán)如隔內(nèi)側(cè)核、弓狀核、斜角帶核等的PRV免疫陽性細(xì)胞表達(dá)明顯減少；部分核團(tuán)如視前區(qū)、下丘腦腹內(nèi)側(cè)核甚至無陽性表達(dá)。而OVX+EA組在相同核團(tuán)內(nèi)的陽性細(xì)胞數(shù)量與OVX相比明顯增加,INT和INT+EA比較,無顯著差異。
　　 (三)用

6、PRV-gG--TK--EGFP示蹤結(jié)果顯示,四組大鼠的脊髓、腦干、下丘腦以及大腦皮層均可觀察到PRV-gG--TIC--EGFP免疫陽性細(xì)胞,分布在脊髓的腰、胸、頸段的腹側(cè)和背側(cè)角,腦干孤束核、巨細(xì)胞網(wǎng)狀核、腦橋被蓋網(wǎng)狀核、腦橋尾側(cè)網(wǎng)狀核、三叉神經(jīng)脊束核、外側(cè)網(wǎng)狀核、斜方體核、中鋒大核、下橄欖核；丘腦網(wǎng)狀核、隔內(nèi)側(cè)核、下丘腦室旁核、視交叉部的弓狀核、視前區(qū),以及皮層的紋狀區(qū)等部位；陽性細(xì)胞的計數(shù)和統(tǒng)計結(jié)果表明,OVX組下丘腦部與神經(jīng)內(nèi)

7、分泌密切相關(guān)的核團(tuán),如隔內(nèi)側(cè)核,弓狀核,室旁核和視前區(qū)的PRV免疫陽性細(xì)胞數(shù)量明顯減少,OVX+EA組在相同核團(tuán)內(nèi)的陽性細(xì)胞數(shù)與OVX相比明顯增加,INT與INT+EA相比則無顯著差異。
　　 結(jié)論:在生理狀態(tài)下針刺動物穴位,針刺信號沿該穴位的神經(jīng)解剖通路傳導(dǎo)；去卵巢后,機(jī)體功能發(fā)生異常,原有神經(jīng)通路受到影響；針刺特定穴位可能促進(jìn)了某些神經(jīng)通路的結(jié)構(gòu)或功能的恢復(fù),其機(jī)制可能與針刺“關(guān)元”穴提高去卵巢大鼠體內(nèi)雌激素水平有關(guān)；針刺“