兔腰椎間盤退變動(dòng)物模型中鋅指蛋白A20和NF-κB的表達(dá)及其作用研究.pdf

1、目的：
　　檢測(cè)鋅指蛋白 A20、NF-κB在兔正常及退變腰椎間盤髓核組織中的表達(dá)，并在體外培養(yǎng)原代正常及退變的兔腰椎間盤髓核細(xì)胞，并進(jìn)一步用內(nèi)毒素（LPS）刺激髓核細(xì)胞，觀察鋅指蛋白A20、NF-κB及相關(guān)炎性因子的表達(dá)及其相互關(guān)系。
　　方法：
　　構(gòu)建兔腰椎間盤退變動(dòng)物模型，獲取兔腰椎間盤退變模型中正常及退變的椎間盤組織，HE染色觀察椎間盤髓核及纖維環(huán)的形態(tài)變化，免疫組化檢測(cè)椎間盤髓核細(xì)胞鋅指蛋白A20、NF-κ

2、B p65蛋白及Ⅱ型膠原（COL-Ⅱ）的表達(dá)。體外分離、培養(yǎng)獲取的正常和退變兔腰椎間盤髓核細(xì)胞，分為正常組、退變組、內(nèi)毒素（LPS）刺激組和 NF-κB抑制劑組，Real-time PCR分別檢測(cè)各組A20、IL-1β、TNF-α、NF-κB、Ⅱ型膠原mRNA的表達(dá)變化。Western blot觀察A20、p65、Ⅱ型膠原蛋白的表達(dá)變化。ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-1β、TNF-α的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)

3、退變組髓核細(xì)胞數(shù)量明顯減少，髓核細(xì)胞聚集成團(tuán)，Ⅱ型膠原表達(dá)下降，A20、p65蛋白表達(dá)升高；細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),與正常組相比，退變組A20、TNF-α、IL-1β、p65表達(dá)在mRNA及蛋白水平均明顯升高，Ⅱ型膠原表達(dá)降低（＜0.05）；在LPS刺激組中A20、TNF-α、IL-1β、p65表達(dá)較退變組更為顯著，Ⅱ型膠原降低明顯（P＜0.05），而NF-κB抑制劑組A20、TNF-α、IL-1β、p65表達(dá)下降，Ⅱ型膠原表達(dá)回升，且與LPS刺