外源性表皮生長因子在未成熟腸道粘膜損傷中的作用及其受體表達的研究.pdf

1、目的：本課題通過觀察外源性表皮生長因子(EpidermalGrowthFactor,EGF)對未成熟腸道粘膜損傷中細胞增殖與凋亡的影響,并研究其受體表達的變化,探討表皮生長因子在未成熟腸道粘膜損傷與修復中的可能作用。
　　 方法：新生1日齡SD大鼠30只隨機分為3組,每組10只。A組為正常對照組(母乳喂養(yǎng)組);B組為模型組(NEC+母乳喂養(yǎng)組),C組為干預組(NEC+母乳喂養(yǎng)+皮下注射EGF200μg/kg·d組)。建立NEC(

2、NecrotizingEnterocolitis,NEC)模型,新生鼠置入缺O(jiān)2箱中給予100％N2流量15L/min缺氧90s,隨后置入冰箱給予4℃冷刺激,持續(xù)10min,結(jié)束后放回保育箱,每天2次,連續(xù)3天,放回母鼠身邊喂養(yǎng),最后1次缺氧、冷刺激后24h空腹處死新生鼠。取回盲部近端回腸2～3cm腸道組織固定、包埋、切片。H.E.染色比較三組間的小腸粘膜組織病理學表現(xiàn):免疫組化技術(shù)檢測腸粘膜細胞增殖(PCNA法)與凋亡(TUNEL法)

3、的變化;并應用實時熒光定量PCR技術(shù)(realtimePCR)檢測三組間腸道粘膜中表皮生長因子受體(EGF-R)mRNA的表達。
　　 結(jié)果：(1)NEC建模過程中,B和C組新生鼠不同程度出現(xiàn)活動度下降、嗜睡、攝食下降、胃潴留、腹脹、腹瀉及消瘦表現(xiàn):B組體重增加值明顯低于對照組(P=0.002),C組與B組體重增加值也有明顯差異(P=0.006),C組與對照組比較無明顯差異(P=0.85)。(2)B組小腸粘膜組織病理學評分高于A

4、組,粘膜損傷嚴重;C組小腸粘膜損傷較B組減輕,表現(xiàn)為其平均組織病理學評分低于B組,但仍高于A組。(3)B組腸隱窩區(qū)PCNA陽性細胞數(shù)明顯低于A組(P=0.000);C組腸隱窩區(qū)PCNA陽性細胞數(shù)較B組增多有顯著性差異(P=0.017)。(4)B組小腸粘膜上皮細胞TUNEL陽性細胞數(shù)明顯高于A組(P=0.000);C組小腸粘膜上皮細胞TUNEL陽性細胞數(shù)顯著低于B組(P=0.001)。(5)B組腸粘膜細胞EGFRmRNA水平低于A組(P=

5、0.029),有顯著性差異;C組外源性EGF增加腸粘膜細胞EGFRmRNA的表達(P=0.042),與B組比較有統(tǒng)計學意義,而與A組比較無統(tǒng)計學差異。
　　 結(jié)論：未成熟腸道發(fā)生壞死性小腸結(jié)腸炎時,其粘膜損傷嚴重,腸粘膜細胞除發(fā)生細胞壞死以外,細胞凋亡亦增加、細胞增殖卻減慢。外源性給予表皮生長因子,可減輕腸粘膜損傷程度,減少粘膜細胞凋亡同時也增加細胞增殖。外源性表皮生長因子還可影響未成熟腸道粘膜損傷時其受體的表達。外源性表皮生長