左卡尼汀對波動性高糖處理的大鼠心肌細胞脂聯(lián)素受體表達影響的實驗研究.pdf

1、研究主要目的:本課題意研究波動性高糖對大鼠心肌細胞脂聯(lián)素受體(AdipoR)表達的影響，并探討在補充了L-CN后心肌細胞AdipoR的表達變化情況。從而明確L-CN在其中的作用。如果實驗結(jié)果像預期所想，那么我們可以推想左旋卡尼汀在改善糖尿病心肌能量代謝的同時，可通過增加脂聯(lián)素受體的表達水平達到降低胰島素抵抗及糖尿病相關性肥胖的作用。并可通過后續(xù)動物實驗、臨床觀察驗證此設想。從而左旋卡尼汀可為同時患有缺血性心臟疾病，糖尿病的患者帶來福音。

2、
　　 研究方法:一、大鼠心肌細胞（RMCs）的培養(yǎng)與鑒定SD大鼠心肌細胞株(購自上海中科院)，細胞復蘇，DMEM培養(yǎng)基（6.1mmol/L）常規(guī)培養(yǎng)，觀察細胞形態(tài)，臺盼藍染色計數(shù)并鑒定細胞存活率。二、波動性高糖處理大鼠心肌細胞實驗用細胞先經(jīng)過無血清DMEM（6.1mmol/L）培養(yǎng)基預處理12h，使其處于同步化狀態(tài)。實驗分組：普通培養(yǎng)基組、高糖培養(yǎng)基組、波動性高糖培養(yǎng)基組、L-CN 處理各組。波動性高濃度葡萄糖(即每8h輪換加

3、入5.5mmol/L或20mmol/L葡萄糖溶液)常規(guī)培養(yǎng)5d。后用CCK8 法檢測RMCs的增殖活化情況。三、L-CN刺激波動性高糖處理的大鼠心肌細胞（一）不同濃度L-CN刺激24h。L-CN 處理組（工作濃度分別為102μμ,2.5×102μμ,5×102μμ，103μμ，104μΜ）。（二）一定濃度L-CN 刺激不同時間L-CN工作濃度5×102μμ，L-CN處理組(5×102μμ刺激0h、4h、8h、12h、24h、36h、48

4、h)，四、檢測CCK8 法檢測RMCs增殖活化情況。ReAltime PCR 檢測AdipoR mRNA表達的改變。五、統(tǒng)計學分析數(shù)據(jù)用x±s表示，所有統(tǒng)計學數(shù)據(jù)均用SPSS l8.0軟件處理：組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t 檢驗，方差齊性用LSD方法比較；方差不齊用Dunnett’s方法比較。P<0.05認為有統(tǒng)計學差異。
　　 結(jié)果:（一）細胞計數(shù)及存活率鑒定臺盼藍染色RMCs存活率在90％以上，能滿足實驗需要

5、。（二）CCK8 法檢測RMCs的增殖活化情況1、CCK8 法檢測RMCs在不同濃度L-CN 刺激24h后的增殖活化情況。與普通培養(yǎng)基組相比，高糖組心肌細胞OD值降低不明顯；波動性高糖組心肌細胞OD值減小，與普通培養(yǎng)基組比較具有顯著性差異(P<0.05)；L-CN（5×102μΜ）處理組較波動性高糖組OD值增加，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；L-CN（2.5×102、103、104μΜ）處理組較波動性高糖組OD值增加,無統(tǒng)計學意義(P>

6、0.05)；L-CN（105、106μΜ）處理組較波動性高糖組OD值下降。2、CCK8 法檢測RMCs在一定濃度L-CN刺激不同時間后的增殖活化情況。與普通培養(yǎng)基組相比，高糖組心肌細胞OD值降低不明顯；波動性高糖組心肌細胞的OD值減小具有顯著性差異(P<0.05)；L-CN（5×102μμ刺激4h、8h、12h）較波動性高糖組OD值增加，但無統(tǒng)計學意義；L-CN（5×102μμ刺激24h、36h、48h）較波動性高糖組OD值增加(P<0

7、.05)。3、不同濃度L-CN 刺激24h后AdipoR mRNA表達情況與普通培養(yǎng)基組比較，波動性高糖處理組AdipoR mRNA的表達顯著性下降（P<0.01）；與波動性高糖處理組比較在加入L-CN處理的各組心肌細胞中，AdipoR1、AdipoR2mRNA的表達均顯著性升高(P<0.01)；且L-CN的工作濃度在5×102μμ時AdipoR mRNA升高最明顯(P<0.01)。4、一定濃度L-CN 刺激不同時間后AdipoR mR

8、NA表達情況與波動性高糖組比較，在加入L-CN（5×102μΜ）處理的各時相心肌細胞中，AdipoR1mRNA的表達均有升高，且在藥物作用24h時升高最明顯(P<0.05)。與AdipoR1相比AdipoR2 mRNA的表達表現(xiàn)出不穩(wěn)定的特點。與波動性高糖組比較，在加入L-CN（5×102μΜ）處理4h時AdipoR2 mRNA的表達不升反而下降；12h時與波動性高糖組比較升高但無統(tǒng)計學意（P>0.05）；作用在24h、36h、48h時

9、AdipoR2 mRNA的升高與作用時間成正相關(P<0.01)。
　　 結(jié)論:波動性高糖與單純高糖相比對細胞的損害作用更強，左卡可在一定程度上降低波動性高糖引起的細胞損害作用，藥物有效濃度在102-104μμ之間，且左卡對波動性高糖處理的大鼠心肌細胞的這種促增值作用表現(xiàn)出時間依賴性的特點。L-CN處理后RMCs AdipoR1mRNA、AdipoR2 mRNA均明顯增高（P<0.01），當L-CN工作濃度在5×102μμ時，A