頸椎舒顆粒對(duì)大鼠退變頸椎間盤中AQP1、3及VEGF的影響研究.pdf

1、一、目的與意義
　　 頸椎病又稱頸椎綜合癥(Cervical syndrome),是頸部椎間盤、骨骼、軟骨、韌帶發(fā)生退行性變,繼發(fā)性刺激或壓迫周圍或臨近的脊髓、神經(jīng)根、血管、軟組織、交感神經(jīng)等組織結(jié)構(gòu),并由此而引起各種不適的一組癥候群。流行病學(xué)資料顯示:2002年廣東省佛山市大學(xué)教職工及其家屬調(diào)查顯示:患病率10.78％,2008年蘭州市居民患病率13.70％。2002年湘雅二院體檢病人中各職業(yè)頸椎病發(fā)病率分別為干部、技術(shù)員、財(cái)

2、會(huì)人員發(fā)病率分別高達(dá)78.83％、74.21％、58.70％,其中工作緊張、長(zhǎng)期伏案者占59.75％；2005年上海陸家嘴地區(qū)金融從業(yè)人員的調(diào)查顯示:患病率17.53％；2008年武漢市中小學(xué)生中有頸椎病癥狀的高達(dá)30％。
　　 隨著工作、生活方式的改變,如長(zhǎng)期伏案工作、電腦和空調(diào)的廣泛使用、私家車的普及等,人們屈頸和遭受風(fēng)寒濕的機(jī)會(huì)不斷增加,造成頸椎病的患病率不斷上升,且發(fā)病年齡有年輕化的趨勢(shì)。
　　 頸椎間盤退變被認(rèn)

3、為是頸椎病發(fā)生和發(fā)展的根本原因。退變的椎間盤出現(xiàn)含水能力降低,蛋白多糖含量下降,膠原類型發(fā)生轉(zhuǎn)換,炎癥介質(zhì)大量釋放。椎間盤的主要生物力學(xué)功能是維持椎間隙高度,對(duì)抗壓縮力。頸椎病患者的影像學(xué)檢查可見(jiàn)椎間隙變窄的改變。多種因素參與了椎間盤退變的病理過(guò)程。其中,椎間盤細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)供給的減少是椎間盤退變的基本因素。Nerlieh等認(rèn)為椎間盤退變的最關(guān)鍵因素是營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)減少。
　　 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)是在胚胎發(fā)生和創(chuàng)傷愈合過(guò)程中啟

4、動(dòng)血管形成的一個(gè)高度特異的有絲分裂原,也是一種有效的血管通透性誘導(dǎo)因子,VEGF的表達(dá)與組織中微血管的密度及新生血管的數(shù)量密切相關(guān)。VEGF可由許多正常細(xì)胞產(chǎn)生和分泌,血管內(nèi)皮細(xì)胞在正常情況下不表達(dá)VEGF,但當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞被置于缺氧環(huán)境時(shí),細(xì)胞內(nèi)VEGF的mRNA水平明顯增加,表明VEGF不僅通過(guò)旁分泌途徑作用于內(nèi)皮細(xì)胞,而且有自分泌機(jī)制參與。退變椎間盤血管內(nèi)瘀血導(dǎo)致壓力增加,血管受壓,循環(huán)受阻,局部組織缺氧,從而誘導(dǎo)VEGF的表達(dá)。

5、r>　　 水通道蛋白的主要功能是轉(zhuǎn)運(yùn)水。根據(jù)AQPs對(duì)水和其它溶質(zhì)的通透性,Ishibashi將AQPs家族分為兩個(gè)亞族:AQP0,AQP1,AQP2,AQP4,AQP5,AQP6,AQP8為一亞族,AQP3,AQP7,AQP9、10屬于另一亞族。椎間盤是一個(gè)富含水分的器官,其中髓核的含水量約為80％。而退變椎間盤的一個(gè)特征性表現(xiàn)即為含水量的下降,在MRI表現(xiàn)為T2加權(quán)信號(hào)減弱。Miyanoto等將髓核皺縮或消失作為椎間盤退變的病理指

6、標(biāo)。所以水的代謝在維持椎間盤的正常生理功能中具有重要的作用。水作為主要的營(yíng)養(yǎng)成分之一,其在滲透壓的作用下,進(jìn)出椎間盤組織,并保持軟骨終板的水化狀態(tài)。營(yíng)養(yǎng)物的滲透率與纖維環(huán)與終板的水化程度密切相關(guān),含水越多,滲透率越高,滲透速度越快。水作為一種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),對(duì)其它營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收有重要的作用。故研究水的代謝對(duì)了解椎間盤退變的始動(dòng)因素有著重要的意義。
　　 課題組根據(jù)長(zhǎng)期臨床實(shí)踐,以傳統(tǒng)中醫(yī)理論自擬“頸椎舒”方,臨床運(yùn)用近20年,療效肯定

7、。前期的臨床研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提示,“頸椎舒”方能改善微循環(huán)、降低血小板聚集率、降低血粘度、增加血管壁彈性、擴(kuò)張血管,能顯著改善神經(jīng)根型頸椎病患者疼痛、麻木、僵硬、寒冷、肌肉萎縮無(wú)力等癥狀。君藥葛根和川芎提取物能修復(fù)受損神經(jīng)根,提高神經(jīng)傳導(dǎo)速度、升高波幅,對(duì)神經(jīng)根型頸椎病根性痛有明顯的止痛作用。
　　 本研究通過(guò)測(cè)量椎間盤高度變化與椎間盤含水量之間的關(guān)系,明確頸椎舒顆粒治療椎間盤退變的途徑。通過(guò)比較治療前后椎間盤退變程度、椎間盤高度

8、、椎間盤含水量與水通風(fēng)道蛋白1、3及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的變化關(guān)系,進(jìn)一步明確頸椎舒顆粒預(yù)防椎間盤退變的機(jī)理。本文進(jìn)一步研究了頸椎舒顆粒中的主要有效成分葛根素對(duì)水通道蛋白1、3的調(diào)節(jié)作用,探討復(fù)方有效成分對(duì)椎間盤退變的作用。
　　 二、方法與內(nèi)容
　　 1大鼠頸椎間盤退變模型的建立
　　 健康清潔級(jí)SD雄性大鼠,體重200-220g,購(gòu)自南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào):SCXK粵2006-0015)。

9、r>　　 將非假手術(shù)組大鼠頸后部剪毛和清潔后,用10％水合氯醛按3.5ml.kg-1體重腹腔內(nèi)注射,麻醉成功后,頸后部剪毛,碘伏消毒,取頸背部正中縱向切口,長(zhǎng)約2～2.5cm,切開(kāi)皮膚后,充分游離各層肌肉,橫向切斷深群頸夾肌和頭、頸、寰最長(zhǎng)肌,完全切除頸髂肋肌與頭半棘肌,然后再依次切斷C2～C7棘上和棘間韌帶,徹底止血后縫合皮膚。術(shù)后3天給予青霉素肌注,8萬(wàn)μ/天。傷口感染水腫較嚴(yán)重的可適當(dāng)延長(zhǎng)注射時(shí)間或增大注射劑量。假手術(shù)組的大鼠切

10、開(kāi)皮膚后就徹底止血后縫合皮膚。術(shù)后12周后造模完成。
　　 2分組與藥物干預(yù)
　　 2.1頸椎舒顆粒的干預(yù)作用
　　 將SD大鼠140只,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,按上述方法建立動(dòng)物模型,其中手術(shù)組大鼠124只,假手術(shù)中16只。假手術(shù)中16只全部造模成功。手術(shù)組在手術(shù)中及術(shù)后共死亡14只,隨機(jī)抽取80只分成5組分別為:頸椎舒顆粒高劑量組、頸椎舒顆粒中劑量組、頸椎舒顆粒低劑量組、模型組、頸復(fù)康組,每組16只。上述6組在干預(yù)

11、4周、8周后各處死8只大鼠。
　　 折算各組藥物的大鼠灌胃量:人的每日劑量折算成大鼠的中等劑量。頸椎舒顆粒的高、中、低劑量分別設(shè)置為2.8 g·kg-1.d-1、1.4 g·kg-1.d-1、0.7 g·kg-1.d-1。頸復(fù)康顆粒根據(jù)推薦劑量確定為0.7 g·kg-1.d-1。模型組和假手術(shù)組給予等容積生理鹽水。上述藥物配制成相同體積不同濃度的藥液。
　　 2.2葛根素對(duì)退變椎間盤中AQP1、3的影響
　　 將

12、SD大鼠90只,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,按前述方法建立椎間盤退變大鼠模型。其中非手術(shù)組大鼠80只,假手術(shù)中8只。假手術(shù)中8只全部造模成功。手術(shù)中及術(shù)后共死亡9只。隨機(jī)抽取40只分成5組分別為:葛根素高劑量組、葛根素中劑量組、葛根素低劑量組、模型組、西樂(lè)葆組。上述6組在干預(yù)8周后處死。頸椎舒顆粒中葛根素的含量約為1.2％,確定葛根素高、中、低的劑量分別為80 mg·kg-1.d-1、40mg·kg-1.d-1、20 mg·kg-1.d-1,將葛

13、根素配成等體積溶液,西藥組給予西樂(lè)葆膠囊18mg·kg-1.d-1腹腔注射。假手術(shù)組、模型組注射同等體積的生理鹽水。
　　 3 X片觀察:
　　 分別在灌胃4周和8周時(shí),3％戊巴比妥鈉40mg·kg-1腹腔內(nèi)注射,麻醉后拍攝大鼠頸椎的正側(cè)位片,嚴(yán)格掌握麻醉藥劑量以及麻醉后至X光片拍攝的時(shí)間,以控制肌肉緊張程度對(duì)椎間盤高度的影響。計(jì)算C4-5椎間盤高度指數(shù)(DHI)。
　　 4病理切片觀察:
　　 分別在給

14、藥4周及8周后用急性失血法處死大鼠,立即取大鼠整段頸椎,范圍自枕骨基底部到第二胸椎,每只大鼠的C5-6椎間盤及相鄰椎體分別放在10％福爾馬林溶液固定,EDTA脫鈣2周,正中矢狀位切開(kāi)頸椎,用酒精梯度脫水,二甲苯透明,石蠟塊包埋,切片機(jī)切片,蘇木素-伊紅染色,顯微鏡下觀察髓核、纖維環(huán)、終板及椎體退變情況。
　　 Miyamoto等的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)椎間盤評(píng)分:
　　 1級(jí):正常椎間盤,纖維環(huán)與髓核排列規(guī)則,軟骨終板分為生長(zhǎng)軟骨和

15、關(guān)節(jié)軟骨層,潮標(biāo)清晰。(1分)
　　 2級(jí):纖維環(huán)板層結(jié)構(gòu)消失,軟骨終板增生。(2分)
　　 3級(jí):髓核皺縮或消失。(3分)
　　 4級(jí):纖維環(huán)有裂隙。(4分)
　　 5級(jí):椎間盤突出或骨贅形成。(5分)
　　 5椎間盤含水量的變化:
　　 采用真空凍干法測(cè)定椎間盤水含量。將大各組鼠處死后,其中C4-5椎間盤用于水含量測(cè)定。取完整椎間盤組織,剝除周圍軟骨組織,以電子天平稱重記錄(濕重)。椎

16、間盤組織置于-80℃真空凍干機(jī)內(nèi)冷凍干燥24小時(shí)后稱重(干重)。椎間盤水含量記算公式如下:椎間盤含水量=濕重-干重。根據(jù)上述公式計(jì)算各組動(dòng)物椎間盤水含量。
　　 6 Western blotting法檢測(cè)椎間盤水通道蛋白AQP1、3的變化
　　 將凍干稱重后的C4-5椎間盤用細(xì)胞裂解液裂解組織,BCA定量后上樣。在有足量電泳緩沖液的恒壓電泳儀進(jìn)行電泳(5％積層膠80V,10％分離膠120V)。電泳結(jié)束后,轉(zhuǎn)膜、封閉,然后

17、依次加入一抗、二抗,各步驟之間用TBST充分洗滌。最后用ECL顯色液浸濕后顯像。同上步驟測(cè)各組β-actin的蛋白表達(dá)。用AQP1/β-actin的平均灰度值表示AQP1的相對(duì)蛋白表達(dá)量:用AQP3/β-actin的平均灰度值表示AQP3的相對(duì)蛋白表達(dá)量。
　　 7 Western blotting法檢測(cè)椎間盤VEGF的變化
　　 將凍干稱重后的C4-5椎間盤用細(xì)胞裂解液裂解組織,BCA定量后上樣。在有足量電泳緩沖液的恒

18、壓電泳儀進(jìn)行電泳(5％積層膠80V,10％分離膠120V)。電泳結(jié)束后,轉(zhuǎn)膜、封閉,然后依次加入一抗、二抗,各步驟之間用TBST充分洗滌。最后用ECL顯色液浸濕后顯像。同上步驟測(cè)各組β-actin的蛋白表達(dá)。用VEGF/β-actin的平均灰度值表示VEGF的相對(duì)蛋白表達(dá)量。
　　 8數(shù)據(jù)處理
　　 數(shù)據(jù)用SPSS16.0軟件進(jìn)行析因設(shè)計(jì)的方差分析,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示。各組大鼠治療4周和8周椎間盤含水

19、量、椎間盤高度指數(shù)、AQP1、AQP3和VEGF的變化比較,采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(Two Independent-Samples tTest)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,不同用藥組間比較采用單因素方差分析(One-wayANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,方差齊時(shí)多重比較采用LSD-t法檢驗(yàn)；方差不齊時(shí),用近似方差分析的Welch法,多重比較采用Dunnett T3法檢驗(yàn)。各組大鼠退變等級(jí)采用多組等級(jí)資料,對(duì)等級(jí)資料采用頻數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述,采用多個(gè)獨(dú)立樣本非參數(shù)

20、檢驗(yàn)Kruskal-Wallis法,P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 三、結(jié)果
　　 所有大鼠無(wú)一脫失,均進(jìn)入實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析,無(wú)明顯的體重減輕。傷口愈合良好,無(wú)自噬及舔咬,無(wú)膿性分泌物。
　　 1頸椎舒顆粒對(duì)大鼠退變頸椎間盤高度指數(shù)變化的影響
　　 4周組與8周組大鼠頸椎間盤高度指數(shù)差異有顯著性意義(F=5.52,P=0.026),各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=60.28,P=0.000),各時(shí)間點(diǎn)與分組

21、間有交互效應(yīng)(F=4.45,P=0.001),說(shuō)明組間差異在4周和8周不一樣。
　　 4周組與8周組兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)顯示,各組除假手術(shù)組差異無(wú)顯著性意義(t=0.79,P=0.454)外,其余各組用藥4周、用藥8周大鼠椎間盤高度指數(shù)差異均有顯著性意義(分別為t=10.78,t=7.64,t=11.53,t=15.28,t=9.75；P<0.01)。
　　 組間多重比較,用藥4周后,與模型組相比,各組均能增加椎間盤高度指數(shù)

22、,差異有顯著性意義(P<0.05或P<0.01)；高劑量組與中劑量組、頸復(fù)康組比較差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)；中劑量組與低劑量組比較差異有顯著性意義(P<0.05)。各藥物干預(yù)組,以高劑量組療效最佳,高劑量組椎間盤高度指數(shù)最高,模型組最低。用藥8周后,與模型組相比,各組組均能增加椎間盤的高度指數(shù),差異有顯著性意義(P<0.05或P0.05)；中劑量組與低劑量組比較

23、差異有顯著性意義(P<0.05)。各藥物干預(yù)組,以高劑量組療效最佳,高劑量組椎間盤高度指數(shù)最高,模型組最低。
　　 由上說(shuō)明,與模型組相比,各藥物干預(yù)組均能增加椎間盤的高度指數(shù),并且存在時(shí)間和劑量依賴性,其中頸椎舒顆粒高劑量組療效最好。
　　 2頸椎舒顆粒對(duì)大鼠退變頸椎間盤病理切片變化的影響
　　 由病理切片可見(jiàn),假手術(shù)組大鼠頸椎間盤潮標(biāo)清晰可見(jiàn),纖維環(huán)結(jié)構(gòu)清晰,髓核組織未見(jiàn)明顯的皺縮,鈣化的關(guān)節(jié)軟骨較薄,鈣化的

24、軟骨下分布有大的血管,4周組與8周組差異不明顯。模型組大鼠頸椎間盤出現(xiàn)退行性改變,纖維環(huán)板層結(jié)構(gòu)紊亂,排列輕度不規(guī)則,髓核組織皺縮或變小,少數(shù)髓核輕度突出,關(guān)節(jié)軟骨鈣化層及非鈣化層均增厚。8周組較4周組變化明顯。各藥物干預(yù)組:大鼠椎間盤形態(tài)較模型組有明顯改善。頸椎舒顆粒各劑量組大鼠椎間盤形態(tài)接近對(duì)照組,光鏡下觀察形態(tài)結(jié)構(gòu)較完整,纖維環(huán)排列比較規(guī)則,髓核比較飽滿,潮標(biāo)可見(jiàn),終板內(nèi)血管充血情況改善,血管芽多于模型組,其中8周組較4周組變化明

25、顯。
　　 治療4周后,6組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=11.43,P=0.043)；椎間盤退變級(jí)別秩次分別為20.88、26.12、30.25、33.56、22.81,13.38根據(jù)平均秩次推斷,以頸椎舒高劑量組退變級(jí)別最少,頸復(fù)康組次之,模型組最多。治療8周后,6組之間差異有顯著性意義(x2=12.06,P=0.034)；頸椎舒高、中、低劑量組,模型組,頸復(fù)康組,假手術(shù)組發(fā)作級(jí)別秩次分別為20.12、25.00、29.12、

26、36.06、21.50、15.19,根據(jù)平均秩次推斷,高劑量組退變級(jí)別最輕,頸復(fù)康組次之,模型組最多。
　　 3頸椎舒顆粒對(duì)大鼠退變頸椎間盤含水量變化的影響
　　 4周組與8周組大鼠頸椎間盤的含水量差異有顯著性意義(F=10.52,P=0.002),各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=220.78,P=0.000),各時(shí)間點(diǎn)與分組間有交互效應(yīng)(F=6.69,P=0.000),說(shuō)明組間差異在4周和8周不一樣。
　　 4周

27、組與8周組兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)顯示,各組除假手術(shù)組差異無(wú)顯著性意義(t=1.23,P=0.241)外,其余各組用藥4周、用藥8周大鼠椎間盤含水量差異均有顯著性意義(分別為t=3.34,P=0.005；t=2.30,P=0.037;t=2.75,P=0.016；t=5.89,P=0.000；t=4.02,P=0.001)。
　　 組間多重比較,用藥4周后,與模型組相比,各組組均能增加椎間盤的含水量,差異有顯著性意義(P<0.05或P<

28、0.01)；高劑量組與中劑量組、頸復(fù)康組比較差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)；中劑量組與低劑量組比較差異有顯著性意義(P<0.05)。各藥物干預(yù)組,以高劑量組療效最佳,高劑量組含水量最高,模型組最低。用藥8周后,與模型組相比,各組組均能增加椎間盤的含水量,差異有顯著性意義(P<0.05或P<0.01)；高劑量組與中劑量組、頸復(fù)康組比較差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)；中劑量組與低劑量組比較差異有顯著性意義(P<0.05)。各藥物干預(yù)組,

29、以高劑量組療效最佳,高劑量組含水量最高,模型組最低。
　　 由上說(shuō)明,與模型組相比,各藥物干預(yù)組均能增加椎間盤的含水量,并且存在時(shí)間和劑量依賴性,其中頸椎舒顆粒高劑量組療效最好。
　　 4頸椎舒顆粒對(duì)大鼠退變頸椎間盤AQP1變化的影響
　　 4周組與8周組大鼠頸椎間盤水通道蛋白1的含量差異有顯著性意義(F=70.65,P=O.000),各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=102.60,P=0.000),各時(shí)間點(diǎn)與分組間

30、有交互效應(yīng)(F=476.09,P=0.000),說(shuō)明組間差異在4周和8周不一樣。
　　 4周組與8周組兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)顯示,各組除假手術(shù)組差異無(wú)顯著性意義(t=1.60,P=0.184)外,用藥4周、用藥8周大鼠頸椎間盤水通道蛋白1的含量差異均有顯著性意義(分別為t=7.50,P=0.000；t=12.51,P=0.000；t=6.15,P=0.004；t=9.40,P=0.001:t=9.23,P=0.001)。
　　

31、 組間多重比較,用藥4周后,與模型組相比,各組均能增加頸椎間盤水通道蛋白1的含量,差異有顯著性意義(P<0.05或P<0.01)；高劑量組與中劑量組、頸復(fù)康組比較差異無(wú)顯著性意義(P>0.05):中劑量組與低劑量組比較差異有顯著性意義(P<0.05)。各藥物干預(yù)組,以高劑量組療效最佳,高劑量組頸椎間盤水通道蛋白1的含量最高,模型組最低。用藥8周后,與模型組相比,各組組均能增加頸椎間盤水通道蛋白1的含量,差異有顯著性意義(P<0.05或P

32、<0.01)；高劑量組與中劑量組、頸復(fù)康組比較差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)；中劑量組與低劑量組比較差異有顯著性意義(P<0.05)。各藥物干預(yù)組,以高劑量組療效最佳,高劑量組水通道蛋白1最高,模型組最低。
　　 由上說(shuō)明,與模型組相比,各藥物干預(yù)組均能增加頸椎間盤水通道蛋白1的含量,并且存在時(shí)間和劑量依賴性,其中頸椎舒顆粒高劑量組療效最好。
　　 5頸椎舒顆粒對(duì)大鼠退變頸椎間盤AQP3變化的影響
　　 4周組

33、與8周組大鼠頸椎間盤水通道蛋白3的含量差異有顯著性意義(F=25.43,P=0.000),各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=665.59,P=0.000),各時(shí)間點(diǎn)與分組間有交互效應(yīng)(F=26.07,P=0.000),說(shuō)明組間差異在4周和8周不一樣。
　　 4周組與8周組兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)顯示,各組除假手術(shù)組差異無(wú)顯著性意義(t=2.44,P=0.720)外,用藥4周、用藥8周大鼠頸椎間盤水通道蛋白3的含量差異均有顯著性意義(分別為t

34、=7.00,P=0.002；t=10.39,P=0.000:t=13.79,P=0.000;t=5.16,P=0.007;t=9.31,P=0.001)。
　　 組間多重比較,用藥4周后,與模型組相比,各組均能增加頸椎間盤水通道蛋白3的含量,差異有顯著性意義(F=566.36,P=0.000)。各藥物干預(yù)組,以高劑量組療效最佳,高劑量組頸椎間盤水通道蛋白3的含量最高,模型組最低。用藥8周后,與模型組相比,各組組均能增加頸椎間盤水

35、通道蛋白3的含量,差異有顯著性意義(P<0.05或P<0.01)；高劑量組與中劑量組、頸復(fù)康組比較差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)；中劑量組與低劑量組比較差異有顯著性意義(P<0.05)。各藥物干預(yù)組,以高劑量組療效最佳,高劑量組水通道蛋白3量最高,模型組最低。
　　 由上說(shuō)明,與模型組相比,各藥物干預(yù)組均能增加頸椎間盤水通道蛋白3的含量,并且存在時(shí)間和劑量依賴性,其中頸椎舒顆粒高劑量組療效最好。
　　 6頸椎舒顆粒對(duì)大

36、鼠退變頸椎間盤VEGF變化的影響
　　 4周組與8周組大鼠椎間盤VEGF的含量差異有顯著性意義(F=18.345,P=0.000),各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=590.71,P=0.000),各時(shí)間點(diǎn)與分組間有交互效應(yīng)(F=29.85,P=0.000),說(shuō)明組間差異在4周和8周不一樣。
　　 4周組與8周組兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)顯示,各組除假手術(shù)組差異無(wú)顯著性意義(t=2.92,P=0.056)外,用藥4周、用藥8周大鼠椎間

37、盤VEGF的含量差異均有顯著性意義(分別為t=12.81,P=0.000；t=4.66,P=0.010；t=6.39,P=0.003；t=7.95,P=0.001;t=5.44,P=0.006)。組間多重比較,用藥4周后,與模型組相比,各組均能增加椎間盤VEGF的含量,差異有顯著性意義(P<0.05或P<0.01)；高劑量組與中劑量組、頸復(fù)康組比較差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)；中劑量組與低劑量組比較差異有顯著性意義(P<0.05)。

38、各藥物干預(yù)組,以高劑量組療效最佳,高劑量組椎間盤VEGF的含量最高,模型組最低。用藥8周后,與模型組相比,各組組均能增加頸椎間盤VEGF的含量,差異有顯著性意義(P<0.05或P<0.01)；高劑量組與中劑量組、頸復(fù)康組比較差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)；中劑量組與低劑量組比較差異有顯著性意義(P<0.05)。各藥物干預(yù)組,以高劑量組療效最佳,高劑量組VEGF最高,模型組最低。
　　 由上說(shuō)明,與模型組相比,各藥物干預(yù)組均能增

39、加椎間盤VEGF的含量,并且存在時(shí)間和劑量依賴性,其中頸椎舒顆粒高劑量組療效最好。
　　 7葛根素對(duì)大鼠退變頸椎間盤含水量的影響
　　 水含量檢測(cè)表明,葛根素高劑量組、中劑量組、低劑量組,模型組,西樂(lè)葆組,假手術(shù)組,各組水含量差異有顯著性意義(F=321.26,P=0.000)。組間多重比較,葛根素高劑量組、中劑量組、低劑量組,西樂(lè)葆組,含水量高于模型組,差異有顯著性意義(P值分別為0.000、0.000、0.013、0

40、.003)。葛根素高劑量組、中劑量組含水量高于西樂(lè)葆組,差異有顯著性意義(P值分別為0.000、0.011)。葛根素高劑量組、中劑量組與低劑量組相比差異有顯著性意義(P值分別為0.000、0.013)。葛根素低劑量組與西樂(lè)葆組差異無(wú)顯著性意義(P=0.998)。
　　 由上說(shuō)明,與模型組相比,各藥物干預(yù)組均能增加椎間盤含水量,并且存在一定的量效關(guān)系,其中葛根素高劑量組療效最好。與西樂(lè)葆相比除葛根素低劑量組療效相當(dāng)外,葛根素高劑量

41、、中劑量組療效均優(yōu)于西樂(lè)葆組。
　　 8葛根素對(duì)大鼠退變頸椎間盤水通道蛋白1的影響
　　 水通道蛋白1檢測(cè)表明,葛根素高劑量組、中劑量組、低劑量組,模型組,西樂(lè)葆組,假手術(shù)組,各組水通道蛋白1的含量差異有顯著性意義(F=123.21,P=0.000)。組間多重比較,葛根素高劑量組、中劑量組、低劑量組,西樂(lè)葆組,水通道蛋白1的含量高于模型組,差異有顯著性意義(P值分別為0.001、0.001、0.015、0.026)。葛根

42、素高劑量組、中劑量組水通道蛋白1的含量高于西樂(lè)葆組,差異有顯著性意義(P值分別為0.004、0.007)。葛根素高劑量組、中劑量組與低劑量組相比差異有顯著性意義(P值分別為0.001、0.019)。葛根素低劑量組與西樂(lè)葆組差異無(wú)顯著性意義(P=0.166)。
　　 由上說(shuō)明,與模型組相比,各藥物干預(yù)組均能增加椎間盤水通道蛋白l的表達(dá),并且存在一定的量效關(guān)系,其中葛根素高劑量組療效最好。與西樂(lè)葆組相比除葛根素低劑量組療效相當(dāng)外,葛

43、根素高劑量、中劑量組療效均優(yōu)于西樂(lè)葆組。
　　 9葛根素對(duì)大鼠退變頸椎間盤水通道蛋白3的影響
　　 水通道蛋白3檢測(cè)表明,葛根素高劑量組、中劑量組、低劑量組,模型組,西樂(lè)葆組,假手術(shù)組,各組水通道蛋白3的含量差異有顯著性意義(F=548.96,P=0.000)。組間多重比較,葛根素高劑量組、中劑量組、低劑量組,西樂(lè)葆組,水通道蛋白3的含量高于模型組,差異有顯著性意義(P值分別為0.000、0.000、0.005、0.04

44、6)。葛根素高劑量組、中劑量組水通道蛋白3的含量高于西樂(lè)葆組,差異有顯著性意義(P值分別為0.000、0.000)。葛根素高劑量組、中劑量組與低劑量組相比差異有顯著性意義(P值分別為0.000、0.001)。葛根素低劑量組與西樂(lè)葆組差異無(wú)顯著性意義(P=0.233)。
　　 由上說(shuō)明,與模型組相比,各藥物干預(yù)組均能增加椎間盤水通道蛋白3的表達(dá),并且存在一定的量效關(guān)系,其中葛根素高劑量組療效最好。與西樂(lè)葆組相比除葛根素低劑量組療效

45、相當(dāng)外,葛根素高劑量、中劑量組療效均優(yōu)于西樂(lè)葆組。
　　 四、結(jié)論
　　 1、頸椎舒顆粒能明顯延緩大鼠頸椎間盤的退變級(jí)別,這一趨勢(shì)存在一定的量效和時(shí)效關(guān)系；2、頸椎舒顆粒能從阻止椎間盤高度降低和減緩水含量減少的角度延緩大鼠頸椎間盤退變,并且這一趨勢(shì)存在一定的量效和時(shí)效關(guān)系；3、頸椎舒顆粒能調(diào)節(jié)水通道蛋白1、3及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá),這可能是延緩椎間盤退變的原因之一；4、葛根素能調(diào)節(jié)水通道蛋白1、3的表達(dá),并且存在一定的