大豆異黃酮調(diào)控PPARγ信號通路治療激素性股骨頭壞死.pdf

1、目的：探討大豆異黃酮調(diào)控PPARγ信號通路誘導BMSCs的成骨分化能力，治療激素性股骨頭壞死的效果及作用機制。
　　方法：1、采用肌注地塞米松磷酸鈉注射液的方法，建立兔早期激素性股骨頭壞死模型，隨后進行行為觀察，6周后進行MRI和組織學檢查。
　　2、全骨髓貼壁法分離兔BMSCs細胞，并進行培養(yǎng)、鑒定及誘導分化。
　　3、MMT法測定BMSCs增殖能力。
　　4、采用RT-PCR檢測Runx2，Col-1，Ost

2、eocalcin mRNA的表達。
　　5、試劑盒測定組織和細胞內(nèi)ALP和TG活性。
　　6、Western blot法檢測BMSCs中PPARγ蛋白的表達。
　　結(jié)果：1、成功建立兔早期激素性股骨頭壞死模型。兔肌注地塞米松磷酸鈉注射液，6周后發(fā)現(xiàn)模型組雙側(cè)股骨頭形態(tài)欠規(guī)則，股骨頭內(nèi)可見斑片狀不規(guī)則異常影像，軟骨下骨缺血、壞死、囊變，骨小梁稀疏;雙側(cè)髖關(guān)節(jié)對稱，關(guān)節(jié)間隙正常;而對照組雙側(cè)股骨頭形態(tài)規(guī)則，股骨頭內(nèi)未見異常

3、信號，骨小梁排列正常，雙側(cè)髖關(guān)節(jié)間隙正常。模型組軟骨下骨板薄，毛細血管網(wǎng)稀疏;骨小梁變細和稀疏，部分斷裂;骨細胞核固縮，空骨陷窩明顯增多;骨髓腔內(nèi)脂肪細胞增多、增大;紅骨髓受壓變少。對照組軟骨下骨板厚而連續(xù)，毛細血管網(wǎng)豐富;股骨頭內(nèi)骨小梁粗大，骨陷窩內(nèi)骨細胞形態(tài)正常;股骨頭骨髓腔內(nèi)脂肪細胞正常，紅細胞豐富，形態(tài)正常。
　　2、骨髓間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)2天后可見大量圓形細胞，僅可見少量梭形細胞。5天后，貼壁細胞具有長梭形的形態(tài)，能夠克隆

4、性增值生長，細胞成菊花狀或旋渦狀形狀來排列。8-10天能夠有70-80％的融合率，細胞仍保持長梭形。骨髓間充質(zhì)干細胞細胞核染色深藍色。取第3代骨髓間充質(zhì)干細胞進行表型鑒定，流式細胞儀分析檢測結(jié)果表明骨髓間充質(zhì)干細胞表面抗原標志CD44、CD90呈陽性，而CD34、CD45呈陰性。骨髓間充質(zhì)干細胞經(jīng)成骨誘導后，可見明顯的鈣化結(jié)節(jié)。經(jīng)成軟骨誘導后，有軟骨基質(zhì)形成。
　　3、大豆異黃酮組處理8周后，兔早期激素股骨頭壞死骨組織中Runx2

5、，Col-1，OC mRNA表達較模型組升高，PPARγ mRNA表達降低，組間比較差異顯著，接近空白對照組。
　　4、大豆異黃酮促進骨髓間充質(zhì)干細胞的細胞增殖，并有時間和劑量依賴性。20μM大豆異黃酮2、3天時，骨髓間充質(zhì)干細胞的增殖明顯增加。
　　5、大豆異黃酮可增加骨髓間充質(zhì)干細胞中的Runx2、Col-1和OC mRNA的表達，增加ALP的活性，降低TG活性。同時，20μM大豆異黃酮明顯抑制了PPARγ的激活。