睪丸酮叢毛單胞菌TetR對(duì)甾體類(lèi)化合物水解酶3,17β-HSD和3α-HSD表達(dá)的調(diào)節(jié).pdf

1、 分類(lèi)號(hào)： 密 級(jí)： 公開(kāi) U D C： 編 號(hào)： 睪丸酮叢毛單胞菌 TetR 對(duì)甾體類(lèi)化合物水解酶3,17β-HSD 和 3α-HSD 表達(dá)的調(diào)節(jié) Identification of a repressor TetR for 3,17β-HSD and 3α-HSD

2、 expressional regulation in Comamonas testosteroni 學(xué)位授予單位及代碼：長(zhǎng)春理工大學(xué) （10186） 工程領(lǐng)域名稱及代碼：化學(xué) （0703） 研 究 方 向：生物化學(xué)分析 申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別： 碩士 指 導(dǎo) 教 師：何秀霞 副教授 研 究 生： 陳羚

3、 論文起止時(shí)間：2014.09—2016.12 摘 要 環(huán)境中過(guò)多甾體激素而產(chǎn)生的健康問(wèn)題，備受人們關(guān)注，睪丸酮叢毛單胞桿菌分泌的 3α-HSD 和 3,17β-HSD 是分解類(lèi)固醇類(lèi)反應(yīng)中重要的兩種功能酶。通過(guò)研究一些調(diào)節(jié)因子對(duì) 3α-HSD 和 3,17β-HSD 表達(dá)的調(diào)節(jié)，給甾體激素降解提供更多的理論依據(jù)。本文將 TetR 基因通過(guò) PCR 技術(shù)從睪丸酮叢毛單胞桿菌全序列擴(kuò)增出來(lái)。 為了證明該基因的功能，將 Te

4、tR 克隆進(jìn) pET-15b、pUC19、pK18 這幾種不同的表達(dá)載體并分別與帶有 3α-HSD 和 3,17β-HSD 調(diào)控序列的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化， 并用不同甾體激素誘導(dǎo)分析 TetR 的表達(dá)調(diào)控作用。 通過(guò)熒光檢測(cè)和 ELISA 檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在有 TetR 表達(dá)的共轉(zhuǎn)化菌中，3α-HSD 蛋白的表達(dá)量比沒(méi)有轉(zhuǎn)入 TetR 基因的細(xì)菌相比明顯降低 （在 TetR 作用下 3α-HSD 蛋白的表達(dá)含量降低了 32.72％）。同樣在有 TetR

5、 表達(dá)的共轉(zhuǎn)化菌中 3,17β-HSD 蛋白的表達(dá)量比沒(méi)有轉(zhuǎn)入 TetR 基因的細(xì)菌相比明顯降低（蛋白表達(dá)量下降 26.20％）。表明 TetR 是3α-HSD 和 3,17β-HSD 的抑制子，TetR 對(duì) 3,17β-HSD 的阻遏區(qū)域在 P2 處。且睪丸酮可以解除 TetR 蛋白對(duì) 3α-HSD 蛋白和 3,17β-HSD 蛋白表達(dá)的抑制作用。 進(jìn)一步制備 TetR多克隆抗體，通過(guò) ELISA 驗(yàn)證 TetR 蛋白表達(dá)不受甾體激素