瓊玉膏干預衰老大鼠模型的脾臟差異蛋白研究.pdf

1、目的:
　　對衰老機理的研究是現(xiàn)代老年基礎醫(yī)學研究中一項重要課題，現(xiàn)已有大量實驗數(shù)據(jù)成為眾多衰老機制學說立足的證據(jù)。本實驗將以D-半乳糖致衰老雄性SD大鼠的脾臟作為實驗的研究對象，應用瓊玉膏方進行干預，運用蛋白質組學技術，對脾臟總蛋白進行差異分析，分析瓊玉膏作用于的差異蛋白的蛋白定量、功能性質，從而解釋瓊玉膏在延緩衰老中的作用機理，為開發(fā)瓊玉膏制劑開創(chuàng)實驗基礎和理論依據(jù)。
　　方法:
　　將42只6月齡SD雄性大鼠隨機

2、分為3組，空白組、模型組、藥物組，每組14只，空白組采用腹腔注射生理鹽水300mg/kg·d，灌胃蒸餾水5.83ml/kg·d;模型組采用腹腔注射D-半乳糖300mg/kg·d，灌胃蒸餾水5.83ml/kg·d;藥物組采用腹腔注射D-半乳糖300mg/kg·d，灌胃瓊玉膏5.83ml/kg·d.連續(xù)40天后，進行血清、心臟和脾臟組織提取。利用iTRAQ技術進行蛋白質組學研究，提取總蛋白、對蛋白質進行酶解、肽段標記、肽段除鹽、質譜鑒定，運

3、用Mascot搜庫對蛋白質進行定性定量分析，再從Uniprot-SwissProt_Rat庫中查詢蛋白質定性信息，鑒定總蛋白，分析組間差異蛋白的功能及屬性。
　　結果:
　　1.建立了D-半乳糖致衰亞急性大鼠模型
　　2.與空白組相比，模型組大鼠血清MDA含量較高，兩組大鼠間的血清MDA含量對比有顯著差異，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與模型組大鼠相比，藥物組大鼠血清MDA含量較低，有顯著性差異，具有統(tǒng)計學意義(P＜

4、0.01)。
　　3.與空白組相比較，模型組大鼠的心臟組織SOD含量較低，兩組大鼠間的心臟組織SOD含量對比有顯著差異，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與模型組大鼠相比，藥物組大鼠心臟組織SOD含量較高，有顯著性差異，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　4.運用iTRAQ蛋白質組學技術，比較模型組和藥物組的脾臟組織，發(fā)現(xiàn)共有18種蛋白質的表達量在組間發(fā)生了變化:藥物組與模型組相較，上調蛋白7個，包括Δ1-二氫吡咯-5-羧酸

5、脫氫酶，線粒體、高爾基SNAP受體復合物1、CDC42效應蛋白1、乳腺癌易感基因1型、C型凝集素結構域家族11成員A、NGFI-A結合蛋白1、線粒體解偶聯(lián)蛋白3;藥物組與模型組相比，下調蛋白11個，包括蛋白酪氨酸磷酸酶非受體型6、絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶PP1、煙酰胺磷酸核糖轉移酶、鈣調磷酸酶B同源蛋白1、E3泛素蛋白連接酶Cbl-b、磷酸肌3-磷酸、冠蛋白-7、Endophilin-B2、G蛋白信號調節(jié)蛋白1、Uncharacteri