益母草堿的合成及其對心血管保護(hù)作用的研究.pdf

1、近年來,心血管疾病的發(fā)病率和致殘致死率在全世界范圍內(nèi)呈明顯上升趨勢[1],其中缺血性心臟病是臨床最常見的心血管疾病之一,缺血性心臟病是由于心臟冠狀循環(huán)改變,引起冠狀血流和心肌需求之間不平衡而導(dǎo)致的心肌損害。急性冠狀動(dòng)脈狹窄和閉塞可引起的急性心肌缺血甚至心肌梗死。心肌缺血(myocardialisehemia,MI)治療方法很多,其中藥物治療不失為一重要手段。雖然硝酸酯類、鈣通道阻滯劑和β-受體阻斷藥等傳統(tǒng)抗心肌缺血藥物具有較好治療作用,

2、但均存在一定的不足之處,所以對抗心肌缺血藥物的探索和抗心肌缺血機(jī)制的研究仍是一項(xiàng)重要的研究課題。由于中藥的多靶點(diǎn)、多途徑、副作用小等作用特點(diǎn),因此對傳統(tǒng)中藥的研究越來越受到人們的重視,益母草為唇科益母草屬植物,具有活血、祛瘀、調(diào)經(jīng)、利水、清熱解毒的功效,用于治療月經(jīng)不調(diào)、產(chǎn)后腹痛等[2]。近年來,隨著對其研究的逐漸增多,其藥用價(jià)值、尤其在治療心血管疾病方面的作用得到較深入的認(rèn)識[3,4,5]。我們的研究發(fā)現(xiàn)并證明了益母草的有效活性成分可

3、被用于心功能的保護(hù),并闡述了益母草有效活性成分的抗氧化機(jī)制[6,7,8,9]。有文獻(xiàn)報(bào)道,有效活性成分中的特異生物堿益母草堿能通過抑制外鈣內(nèi)流和內(nèi)鈣釋放而發(fā)揮舒張血管平滑肌的作用[10],本研究進(jìn)一步開展益母草中的有效成分益母草堿對心肌缺血的保護(hù)作用。
　　 益母草堿在全草中的含量較少,分離提取得到的純度也不高,因此,本實(shí)驗(yàn)探索出全新的益母草堿合成工藝,以丁香酸為起始原料,丁香酸的酚羥基用芐基保護(hù)并與中間體氨基丁醇進(jìn)行縮合反應(yīng),

4、建立了一條工藝簡單、廉價(jià)、環(huán)保的全新合成益母草堿的途徑,并經(jīng)高效液相色譜分析測定純度可達(dá)99.8％。
　　 本實(shí)驗(yàn)用化學(xué)全合成的方法得到益母草堿,采用乳鼠心肌細(xì)胞缺氧、H9c2細(xì)胞系氧化應(yīng)激、大鼠急性心肌梗死和心衰的體內(nèi)和體外模型,用DNA電泳檢測斷裂的DNA片段,用RT-PCR和Westernblot檢測凋亡蛋白和信號分子來闡明益母草堿的心肌保護(hù)作用。
　　 結(jié)果表明,益母草堿提高缺氧,雙氧水(hydrogenpero

5、xide,H2O2)損傷的心肌細(xì)胞的存活率及降低乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase,LDH)的漏出率,增加抗氧化酶的活力及直接消除活性氧簇(reactiveoxygenspecies,ROS)作用,抑制心肌細(xì)胞凋亡,減輕細(xì)胞內(nèi)鈣超載,同時(shí)降低H2O2誘導(dǎo)的因ROS激活的線粒體凋亡途徑,包括膜電位升高,細(xì)胞色素c的釋放和Bax蛋白從胞漿到線粒體的轉(zhuǎn)位,并且抑制caspase-3的激活及多聚酶(ADP-核糖)聚合酶(PAR

6、P)的斷裂,發(fā)揮了對心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。體內(nèi)研究表明益母草堿能降低急性心肌梗死大鼠的梗死面積、降低血漿中的肌酸激酶(creatinekinase,CK)、LDH的含量、提高抗氧化酶活力并抑制心肌細(xì)胞凋亡,同時(shí)益母草堿能增大左室最大變化速率,改善收縮性能,舒張冠脈,使左室舒張末壓降低,提高心衰大鼠的心功能,減輕肺淤血。
　　 綜上所述,我們的研究發(fā)現(xiàn)益母草堿對心肌細(xì)胞有直接的保護(hù)作用主要通過抗氧化,減輕細(xì)胞內(nèi)鈣超載,促進(jìn)Bcl-2