益母草堿對大鼠心肌細胞離子通道作用的研究.pdf

1、益母草堿是傳統(tǒng)中藥益母草中的一種生物堿,幾千年來用于治療婦女痛經、月經不調及其他婦科疾病。研究發(fā)現(xiàn)益母草堿具有廣泛的藥理活性。近年來在國內,有不少以益母草為主要成分的藥物制劑在臨床上用來治療心肌缺血。然而,到目前為止,我們還不明白益母草堿是否對心肌細胞膜上的離子通道有作用。在本次實驗的第一部分中,我們利用全細胞膜片鉗技術研究了益母草堿對單個成年大鼠心肌細胞跨膜離子轉運的影響。這部分的實驗結果表明,益母草堿能夠可逆性的抑制L-型鈣通道電流

2、(Ica,L),并且抑制作用服從劑量依賴性(在鉗制電壓為-40mV時,半數(shù)有效抑制濃度IC50值約為18μM)。益母草堿對于鈉電流(Ina)和鉀電流(Ik)沒有明顯作用(實驗中使用的最大濃度達到200μM)。20和100μM益母草堿都能顯著縮短心肌動作電位時程(APD50及APD90)。在第一部分的實驗結果中,益母草堿對鈣通道的抑制作用最令我們感興趣,因為很多經典的具有心肌保護作用的藥物具有類似的藥理功效(如硝苯地平)。因此我們進一步研

3、究了益母草堿鈣通道阻斷作用的機制。我們發(fā)現(xiàn)有兩點可能與此有關:一是益母草堿能夠影響鈣通道的動力學特征,二是益母草堿能影響鈣通道的蛋白表達。
　　 在對鈣通道動力學的研究過程中,我們發(fā)現(xiàn)20和100μM的益母草堿都能使鈣通道的激活和穩(wěn)態(tài)失活曲線向負電位方向移動。除此之外,上述劑量的益母草堿還能延長鈣通道失活以后的復活時間。接著,我們在第二部分研究中用分子生物學方法觀察了益母草堿對L-型鈣通道α1c亞基mRNA和蛋白表達的影響情況。

4、實驗中,我們以原代培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞為研究對象,主要依靠RT-PCR及Westernblot技術檢測分析相應基因的表達量。實驗結果:心肌細胞在不同劑量的益母草堿(5,10,20,50,100和200μM)作用后,其心肌細胞鈣通道α1c亞基的mRNA表達量明顯下降,較對照組相比分別下降了11.9％,28.4％,47.8％,50.8％,47.8％和46.3％。同時,心肌細胞鈣通道α1c亞基的蛋白表達量在益母草堿作用后也明顯下降,較對照組