伊布利特對兔右室心肌細胞快鈉離子通道的影響.pdf

1、目的：室性心律失常是臨床上的常見病、多發(fā)病，而源自右心室的心律失常有很重要的臨床意義，多數(shù)發(fā)生于30歲左右青年人的心源性猝死與之相關。而關于右室心肌細胞鈉通道的研究卻未見報道。盡管非藥物治療心律失常進展迅速，但抗心律失常藥物仍然是目前心律失常治療的主要手段。近年來研究表明新型Ⅲ類抗心律失常藥物--伊布利特，主要通過延長動作電位和有效不應期來終止折返激動，在多數(shù)臨床實驗中證明有快速轉復房顫、房撲的作用而成為治療心律失常的主要藥物之一。有動

2、物實驗表明，伊布利特可以通過延長心室不應期，抑制室性心律失常的發(fā)生。本研究以酶解法分離新西蘭大白兔右室心肌細胞，采用全細胞膜片鉗記錄技術記錄不同濃度伊布利特對右室心肌細胞快鈉通道的影響，從而探討其抗室性心律失常的部分離子通道機制。 材料與方法： 1.實驗動物：新西蘭純種大耳白兔60只，購自河北醫(yī)科大學實驗動物中心，雌雄不拘，體重1.5～2.0 kg。隨機抽取10只兔作為正常對照組(Con)，25只兔作為伊布利特低濃度組(

3、10-6mmol/L)，25只兔作為伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)。 2.細胞分離：利用酶解(膠原酶I，Sigma公司)的方法分離右室心肌細胞。 3 電流記錄和數(shù)據(jù)分析：應用膜片鉗全細胞記錄方法，記錄伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)及低濃度組(10-6mmol/L)干預下右室心肌細胞INa活性的變化，并與正常對照組進行比較分析。電流記錄的刺激程序由pulse+ pulsefit軟件控制，通道信號經(jīng)EPC-9膜片

4、鉗放大器放大，通過Ag-AgCl電極絲和填充電極內液的微電極導入細胞，產(chǎn)生的電流信號經(jīng)EPC-9轉換，為pulse+ pulsefit軟件采集、分析，采用SPSS13.0軟件包作統(tǒng)計學分析。 結果： 1.伊布利特對右室心肌細胞INa I-V曲線的影響觀察三組細胞INa的I-V曲線，均在-70 mV激活，-20 mV達峰值，+50 mV時反轉。應用伊布利特干預組與對照組相比，I-V曲線上移，以伊布利特高濃度組(10-5mm

5、ol/L)上升更明顯。但INa電壓依賴性不變，對激活電位、峰值電位、反轉電位及I-V曲線的形態(tài)軌跡均無影響。INa峰值電流密度(-20 mV)的比較顯示：對照組為-45.77±4.62pA/pF(n=10 cells)，伊布利特低濃度組(10-6mmol/L)為-29.74±3.79pA/pF(n=10 cells)，峰值電流密度較對照組下降了35.02％，(P＜0.001)；伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)INa峰值電流密度為

6、-18.32±2.82pA/pF(n=10cells)，該組INa峰值電流密度的下降更明顯，較對照組下降了59.97％，(P＜0.001)。伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)與低濃度組(10-6mmol/L)相比較，INa峰值電流密度低濃度組(10-6mmol/L)比高濃度組(10-5mmol/L)高，(P＜0.05)。 2.伊布利特對右室心肌細胞INa穩(wěn)態(tài)失活曲線的影響INa電壓依賴性穩(wěn)態(tài)失活曲線，伊布利特高濃度組(10

7、-5mmol/L)、伊布利特低濃度組(10-6mmol/L)與正常對照組相比，失活曲線明顯左移(即向超極化方向移動)，以伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)左移更加明顯。最大半數(shù)失活電壓(V0.5)對照組為-75.08±3.9mV(n=10 cells)，伊布利特低濃度組(10-6mmol/L)V0.5為-92.72±4.4 mV(n=10cells)，與對照組和伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)比較均相差顯著，(P<0.00

8、1)；伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)為-103.58±4.6 mV(n=10 cells)，與對照組比較有非常顯著的差異，(P<0.001)。 3.伊布利特對右室心肌細胞INa失活后再恢復曲線的影響三組細胞INa失活后再恢復過程，當兩個脈沖間隔時間為15 ms時，對照組INa恢復60.28％，伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)僅恢復34.52％，而伊布利特低濃度組(10-6mmol/L)恢復39.28％，而當兩個

9、脈沖間隔時間為75 ms時，對照組恢復100％，而伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)僅恢復68.51％，伊布利特低濃度組(10-6mmol/L)恢復74.80％。說明布利特高濃度組(10-5mmol/L)和低濃度組(10-6mmol/L)INa再恢復明顯減慢，再恢復時程延長，和對照組比較有顯著性差別，P值分別P<0.001和P<0.05。 結論： 1.本課題通過研究伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)、低濃度組

10、(10-6mmol/L)對右室心肌細胞快鈉離子通道電流的影響，并與對照組相比。結果顯示，伊布利特干預后右室心肌細胞發(fā)生了一系列心電學方面的變化，如INa電流活性降低，顯示伊布利特抑制0相快鈉電流，心肌細胞膜離子通道的異常活動，可引起膜電位降低、動作電位0位相上升速率下降、動作電位時程及心室有效不應期延長，減慢傳導終止折返，這可能是伊布利特抗室性心律失常的部分離子通道機制。 2.伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)與低濃度組

11、(10-6mmol/L)相比較，伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)對INa的抑制作用更為明顯。兩組相比，INa電流.電壓關系曲線(Ⅰ-Ⅴ曲線)、INa電壓依賴性穩(wěn)態(tài)失活曲線、INa失活后再恢復曲線的變化有統(tǒng)計學意義，提示伊布利特的藥理作用在一定范圍內呈現(xiàn)劑量依賴性，這與臨床上隨著劑量的增加伊布利特轉復心律失常的時間縮短相一致，INa電壓依賴性穩(wěn)態(tài)失活曲線左移，說明該藥物的作用也呈電壓依賴性。 3.國內外有研究報道伊布利特對