伊布利特對兔心房肌細胞快鈉電流活性的影響.pdf

1、目的：房顫是臨床上最普遍存在的持續(xù)性心律失常。據(jù)Framingham心臟中心研究，成年人房顫發(fā)生率為每年4％，隨著病人年齡增加，房顫的發(fā)生率也增加，25-35歲人群發(fā)生率少于0.05％，而大于69歲患者年發(fā)生率超過5％。房顫與發(fā)病率尤其與栓塞的發(fā)生密切相關，估計房顫患者每年中風發(fā)生率高達4.5％。房顫能降低活動耐量，也能因長期快速心律失常導致心肌病。電轉復房顫在某些患者可能無效，如長時間的房顫、心房擴大、高齡、潛在疾患、高胸廓阻抗，在應

2、用直流電轉復時，約有20％的房顫患者會發(fā)生轉復失敗，或在數(shù)分鐘內復發(fā)。因此臨床中藥物轉復房顫對改善患者心功能及降低栓塞發(fā)生率具有重要意義。由于CAST實驗已證實某些Ⅰ類抗心律失常藥物可以增加心肌梗死患者的死亡率，在過去10年抗心律失常藥物的研究熱點已經(jīng)從Ⅰ類藥物轉移至Ⅲ類藥物。近年來研究表明新型Ⅲ類抗心律失常藥物-伊布利特，在多數(shù)臨床試驗中證明有快速轉復房顫、房撲的作用而成為治療心律失常的主要藥物之一。目前國內外已對伊布利特的電生理作用

3、做了大量研究，證實伊布利特通過抑制復極時K<'+>外向電流(Ikr)，促進平臺期緩慢內向Na<'+>電流，促進平臺期內向Ca<'2+>內流，從而延長動作電位(APD)時程和有效不應期(ERP)來終止折返激動。國內外對伊布利特離子通道的研究集中在各種K<'+>電流、Ca<'2+>電流及緩慢內向Na<'+>電流，而對快鈉離子通道的研究未見相關報道。國外有相關實驗證實加入鈉通道拮抗劑河豚毒(TTX)后不能縮短伊布利特所延長的APD及ERP，但

4、這不能說明伊布利特對快鈉離子通道沒有影響。本研究以酶解法分離新西蘭大白兔心房細胞，采用全細胞膜片鉗記錄技術直接記錄不同濃度伊布利特對心房細胞快鈉通道的影響，從而探討其抗房顫/房撲的部分離子通道機制。 材料與方法:1 實驗動物：新西蘭純種大耳白兔40只，由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供，雌雄不拘，體質量1．5～2．0kg。隨機抽取10只兔作為正常對照組(Con)，10只兔作為伊布利特10<'-7>mol/L濃度組(10<'-7>)，

5、10只兔作為伊布利特10<'-6>mol/L濃度組(10<'-6>)，10只兔作為伊布利特10<'-5>mol/L濃度組(10<'-5>)。 2 細胞分離：利用酶解(膠原酶I，Sigma公司)的方法分離心房肌細胞，四組細胞均來源于心房細胞。 3 給藥方法：分別把伊布利特純品(由北京紅惠生物制藥股份有限公司提供)溶解于I<,Na>細胞外液中使伊布利特終濃度達到10<'-7>mol/L、10<'-6>mol/L和10<'-5

6、>mol/L，分別用含有不同濃度伊布利特的細胞外液灌流細胞，流速2ml/min，大約3～5分鐘。 4 電流記錄：應用膜片鉗全細胞記錄方法，記錄對照組及伊布利特三個濃度組干預下心房細胞I<,Na>活性的變化，包括I<,Na>I-V曲線、穩(wěn)態(tài)失活曲線及失活后再恢復曲線，并與正常對照組進行比較分析。電流記錄的刺激程序由pulse+pulsefit軟件控制，通道信號經(jīng)EPC-9膜片鉗放大器放大，通過Ag-AgCl電極絲和填充電極內液的微

7、電極導入細胞，產(chǎn)生的電流信號經(jīng)EPC-9轉換，為pulse+pulsefit軟件采集、分析。 5 統(tǒng)計學分析：應用SPSS 10.0軟件包進行統(tǒng)計學分析。計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示，首先進行組間均衡性檢驗，兩組計量資料采用t檢驗，成組資料間比較采用方差分析，率(％)的比較用x<'2>檢驗，以P<0.05為有顯著性差異的標準。 結果 1 伊布利特對兔心房細胞I<,Na>I-V曲線的影響觀察正常對照組、伊布

8、利特三個濃度組(10<'-7>、10<'-6>、10<'-5>mol/L)心房細胞所記錄的原始I<,Na>電流形態(tài)曲線。四組細胞I<,Na>的I-V曲線，均在-70mV激活，-20mV達峰值，+50mV時反轉。應用伊布利特干預組與對照組相比，I-V曲線上移，變化呈濃度依賴性，以伊布利特10<'-5>mol/L濃度組上升最明顯，但I<,Na>電壓依賴性不變，對激活電位、峰值電位、反轉電位及I-V曲線的形態(tài)軌跡均無影響。 I<,Na

9、>峰值電流密度(-20mV)的比較顯示：對照組為-87.12±4.67pA/pF(n=12 cells)，伊布利特10<'-7>mol/L濃度組為-68.82±4.43pA/pF(n=14 cells)，峰值電流密度較對照組下降了21.01％，P<0.05；伊布利特10<'-6>mol/L濃度組I<,Na>峰值電流密度為-45.26±3.46pA/pF(n=11 cells)，較對照組下降了48.05％，P<0.01；伊布利特10<'4

10、>mol/L濃度組I<,Na>峰值電流密度為-33.46±3.11pA/pF(n=11 cells)，較對照組下降了61.59％，P<0.01。伊布利特三個濃度組較對照組均有明顯下降，P<0.05。伊布利特三個濃度組之間比較顯示三組間有顯著差異且呈濃度依賴型。 2 伊布利特對兔心房細胞I<,Na>穩(wěn)態(tài)失活曲線的影響I<,Na>電壓依賴性穩(wěn)態(tài)失活曲線，伊布利特三個濃度組(10<'-7>、10<'-6>、10<'-5>mol/L)與

11、正常對照組相比，失活曲線明顯左移(即向超極化方向移動)，以伊布利特10<'-5>mol/L濃度組左移最明顯。V<,0.5>對照組為-78.6±4.1mV(n=10 cells)，伊布利特10<'-7>mol/L濃度組為-92.7±4.2mV(n=11 cells)，與對照組比較有顯著性差異，P<0.01；伊布利特10<'-6>mol/L濃度組V<,0.5>為-103.3±4.5mV(11=10 cells)，與對照組和伊布利特10<'-

12、7>mol/L濃度組比較均有顯著性差異，P<0.05；伊布利特10<'-5>mol/L濃度組V<,0.5>為-115.1±4.6mV(n=11 cells)，與對照組和伊布利特10<'-7>mol/L濃度組及伊布利特10<'-6>mol/L濃度組比較均有顯著性差異，P<0.05。 3 伊布利特對兔心房細胞I<,Na>失活后再恢復曲線的影響四組細胞I<,Na>失活后再恢復過程，當兩個脈沖間隔時間為15ms時，對照組I<,Na>恢復62％，

13、伊布利特10<'-7>mol/L濃度組恢復40％，伊布利特10<'-6>mol/L濃度組恢復19％，伊布利特10<'-5>mol/L濃度組恢復2％；而當兩個脈沖間隔時間為75ms時，對照組恢復100％，伊布利特10<'-7>mol/L濃度組恢復85％，伊布利特10<'-6>mol/L濃度組恢復58％，伊布利特10<'-5>mol/L濃度組恢復37％。說明伊布利特三個濃度組(10<'-7>、10<'-6>、10<'-5>mol/L)I<,

14、Na>再恢復明顯減慢，再恢復時程延長，和對照組比較有顯著性差異，分別為P<0.05、P<0.01、P<0.001；伊布利特三個濃度組之間比較均有明顯差異，P<0.05。 結論 1 本課題通過研究伊布利特三個濃度組(10<'-7>、10<'-6>、10<'-5>mol/L)對心房細胞快鈉離子通道電流的變化，并與正常對照組相比。結果顯示，伊布利特干預后心房細胞I<,Na>電生理特性發(fā)生了一系列變化，如I<,Na>電流活性降低

15、，I<,Na>電流一電壓曲線(I-V曲線)上移，I<,Na>電壓依賴性穩(wěn)態(tài)失活曲線左移，I<,Na>失活后再恢復時間延長。顯示伊布利特抑制心房細胞O相快鈉電流，心肌細胞膜離子通道的異?；顒樱梢鹉る娢唤档?、動作電位0位相上升速率下降、動作電位時程及心房有效不應期延長，減慢傳導終止折返，這可能是伊布利特抗房性心律失常的部分離子通道機制。 2 伊布利特三個濃度組(10<'-7>、10<'-6>、10<'-5>mol/L)相比較，伊布利特1

16、0<'-5>mol/L對I<,Na>的抑制作用最明顯。伊布利特三個濃度組相比，I<,Na>I-V曲線、I<,Na>穩(wěn)態(tài)失活曲線、I<,Na>失活后再恢復曲線的變化有統(tǒng)計學意義，提示伊布利特的藥理作用在一定范圍內呈現(xiàn)濃度依賴性，I<,Na>電壓依賴性穩(wěn)態(tài)失活曲線左移，說明該藥物的作用也呈電壓依賴性。 3 國內外有研究報道伊布利特對心房肌細胞動作電位平臺期緩慢內向鈉電流有促進作用，而本研究表明伊布利特對心房肌細胞動作電位0相快鈉電流