伊布利特對家兔左心室肌細胞鈉離子通道跨壁異質性的影響.pdf

1、目的：由于心肌橫斷面上各層心肌細胞的復極存在非均一性，在一定條件下，為某些心律失常的發(fā)生提供了有利條件。心室肌中層細胞(M細胞)的電生理特性有別于心內膜下(Endo)、心外膜下(Epi)心肌細胞，使心肌各層的電活動呈非均一性，特別是對抗心律失常藥物的反應呈現顯著差異。心室肌快鈉電流(I<,Na>)是在心肌細胞電生理異質性方面起著重要作用的離子通道電流。伊布利特(Ibutilide)是一種新近推出的Ⅲ類抗心律失常藥物，主要用于快速轉復心房

2、顫動/心房撲動，近期動物試驗中已證實，伊布利特對抑制室性心律失常也有作用。本課題利用全細胞膜片鉗技術，旨在研究伊布利特對左室三層心室肌細胞的I<,Na>異質性的影響，從而探討伊布利特抗室性心律失常作用的離子機制。 材料與方法: 1 實驗動物：新西蘭純種大耳白兔30只，河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供，雌雄不拘，體重2.0-2.5Kg。 2 心肌細胞分離：利用酶解的方法分離出三層心室肌細胞。 3 伊布利特給藥方

3、法及分組：將配好的伊布利特溶液稀釋成10<'-7>M和10<'-6>M，并將其加入細胞外液進行灌流。依據灌流外液中有無伊布利特及伊布利特的濃度，將試驗分為三組：正常對照組、伊布利特(10<'-7>M)組、伊布利特(10<'-6>M)組。 4 電流記錄：應用膜片鉗全細胞記錄方法，記錄三層心室肌細胞I<,Na>活性的變化，伊布利特對心室肌細胞I<,Na>活性的影響，并與正常對照組心肌細胞進行比較分析。電流記錄的刺，激程序由pulse

4、+pulsefit 8.53軟件控制，通道信號經EPC-9膜片鉗放大器放大，通過Ag-AgCl電極絲和填充電極內液的微電極導入細胞，產生的電流信號經EPC-9轉換，為pulse+pulsefit 8.53軟件采集、分析。 5 統計學分析：統計學處理：數據以均數±標準差(x±s)表示，用SPSS 10.0軟件包進行統計學處理，組間均數比較采用方差分析，以P<0.05作為顯著性差異的標準。 結果 1 對照組、伊布利特組各層細

5、胞之間的鈉通道異質性的變化1.1 對照組、伊布利特組各層細胞I<,Na>峰值電流密度的變化正常對照組的中層細胞(M)、心內膜細胞(Endo)和心外膜細胞(Epi)IM<,Na>峰值電流密度分別為-31.53±3.76pA/pF(n=13 cells)、-15.22±2.67 pA/pF(n=12 cells)和-13.00±3.45pA/pF(n=10 cells)，M細胞與Epi和Endo之間比較P均小于0.01，而Epi和Endo之

6、間比較無顯著性差異，P>0.05。伊布利特(10<'-7>M)組的M、Endo和Epi的I<,Na>峰值電流密度分別為-11.32±2.33 pA/pF(n=13 cells)、-9.64±3.42 pA/pF(n=10 ells)、-7.82±2.99 pA/pF(n=10cells)，三者之間比較無顯著差異，P>0.05。伊布利特(10<'-6>M)組的M、Endo和Epi的I<,Na>峰值電流密度分別為-9.60±2.05pA/p

7、F(n=13 cells)、-6.02±2.58 pA/pF(n=10 cells)、-6.70±1.49 pA/pF(n=10 cells)，三者之間比較無顯著差異。 1.2 對照組、伊布利特組各層細胞I<,Na>失活半數電壓(V<,0.5>)的變化正常對照組M、Epi和Endo的I<,Na>失活半數電壓(V<,0.5>)分別為-102.36±8.74mV(n=11cells)、-97.17±15.53 mV(n=11 cel

8、ls)和-93.07±13.79mV(n=10 cells)，M與Epi和Endo比較有顯著性差異，P<0.05，而Epi和Endo比較無顯著性差異，P>0.05。伊布利特(10<'-7>M)組的M、Endo和Epi的I<,Na>V<,0.5>分別為-107.23±6.58 mV(n=11cells)，-102.01±7.32 mV(n=1.1cells)，-99.14±7.74 mV(n=11cells)，內層與外層比較無明顯差異，其

9、余均有顯著差異。伊布利特(10<'-6>M)組的M、Endo和Epi的I<,Na>失活半數電壓(V<,0.5>)分別為-124.56±8.22 mV(n=11cells)，-99.83±7.91.mV(n=11cells)，-108.15±6.92 mV(n=11cells)，內層與外層比較無明顯差異，其余均有顯著差異。 1.3 對照組、伊布利特組各層細胞I<,Na>失活后再恢復的變化伊布利特組與正常對照組相比較均無顯著性差異，

10、P>0.05，但伊布利特組各層細胞的滅活后再恢復明顯減慢。 2 伊布利特對各層細胞鈉通道活性的影響2.1 伊布利特對各層細胞I<,Na>I-V曲線的影響三組之間的M細胞有顯著差異P<0.05；對照組與伊布利特各組之間的Endo細胞有顯著差異，P<0.01，伊布利特各組之間無顯著差異；對照組與伊布利特各組之間Epi細胞有顯著差異P<0.05，伊布利特各組之間無顯著差異。 2.2 伊布利特對各層細胞I<,Na>穩(wěn)態(tài)失活曲線的

11、影響伊布利特各組與對照組之間的M細胞比較有顯著差別P<0.05，伊布利特兩組之間無顯著差異；三組之間Endo細胞有顯著差異P<0.05；對照組與伊布利特各組之間的Epi細胞有顯著差異P<0.01，伊布利特兩組之間無顯著差異。 2．3 伊布利特對各層細胞I<,Na>失活后恢復曲線的影響伊布利特各組與正常對照組內中外層組間比較在45ms、95ms和145ms有顯著差異，P<0.05，伊布利特兩組之間各層比較也有差異P<0.05。

12、 結論 1 兔左室游離壁三層心肌細胞的快鈉電流存在電生理異質性。I<,Na>異質性表現為M細胞較心內膜、心外膜有更大的峰值電流，M細胞的I<,Na>電壓依賴穩(wěn)態(tài)失活曲線失活最快，而失活后再恢復曲線三層細胞無顯著差異。 2 本研究通過觀察伊布利特對心室肌三層細胞鈉離子通道的作用，并與正常對照組進行了對比分析。結果顯示：應用伊布利特后，心室肌三層細胞鈉離子通道受到抑制，其通道活性呈現均一性，使心肌細胞動作電位0相上升速率