丹參素-半胱氨酸綴合物的心血管保護(hù)作用初步研究.pdf

1、[目的]心血管疾病仍是目前危害人類健康的主要疾病。丹參是具有心血管保護(hù)作用的傳統(tǒng)中藥。丹參素是中藥丹參中的主要水溶性成分，化學(xué)名為D-(+)-（3，4-二羥基苯基）乳酸，是丹參中已經(jīng)用于人類臨床實(shí)驗(yàn)的有效單體。對(duì)丹參素進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造后，將丹參素衍生物和半胱氨酸類似物綴合后，得到了一系列新型化合物。本課題研究了這一系列新型化合物的心血管保護(hù)作用及其可能的作用機(jī)制。
　　[方法]本實(shí)驗(yàn)通過過氧化氫(H2O2)刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUV

2、EC)造成的氧化應(yīng)激模型，對(duì)一系列新合成的丹參素-半胱氨酸類似物的綴合物進(jìn)行活性篩選。當(dāng)細(xì)胞在各實(shí)驗(yàn)用無(wú)菌培養(yǎng)板中生長(zhǎng)到90％左右的密度時(shí)，換無(wú)血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)4-6h，然后藥物處理組分別加入陽(yáng)性藥NAC（N-乙酰半胱氨酸，終濃度為5 mmol/L）以及各丹參素-半胱氨酸綴合物（終濃度分別為5×10-6 mol/L，5×10-5 mol/L，10-4 mol/L），作用4h，藥物處理組和氧化應(yīng)激模型組加入H2O2水刺激（H2O2終濃度

3、為200μmol/L），造成氧化應(yīng)激狀態(tài)。10-12h后進(jìn)行各項(xiàng)處理和相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。MTT檢測(cè)細(xì)胞活力;測(cè)定LDH漏出率;測(cè)定抗氧化酶指標(biāo)，MDA，GSH; JC-1法測(cè)細(xì)胞線粒體膜電位，Hoechst染色和AnnexinⅤ-FITC/PI檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;Western Blot檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)的蛋白（Bcl-2，Bax，P53，Caspase-9，Caspase-3和PARP）表達(dá)情況。
　　[結(jié)果]從一系列新型綴合物中找到

4、了5個(gè)具有保護(hù)效果的化合物分別為酰胺類綴合物3a/4a/17a和硫酯類綴合物6a-b。在過氧化氫(H2O2)刺激后，以上化合物處理組的細(xì)胞存活率比未經(jīng)藥物處理組要高，而LDH漏出率則比未經(jīng)藥物處理組低。在過氧化氫(H2O2)刺激后，模型組的脂質(zhì)過氧化物丙二醛(MDA)含量升高，抗氧化物谷胱甘肽(GSH)的活力降低，而化合物3a/4a/17a和6a-b的處理，則能降低MDA的含量，升高GSH的活力。Hoechst染色和流式AnnexinⅤ

5、-FITC/PI染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，化合物4a具有明顯的抑制細(xì)胞凋亡的作用。JC-1線粒體膜電位檢測(cè)實(shí)驗(yàn)和Western Blot方法對(duì)凋亡相關(guān)蛋白的檢測(cè)結(jié)果顯示，化合物4a對(duì)線粒體凋亡途徑有較好的保護(hù)作用。它可以抑制線粒體膜電位的下降，提高抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，降低促凋亡蛋白Bax和P53的表達(dá)，抑制促凋亡蛋白Caspase-9和Caspase-3的活化和PARP的斷裂。
　　[結(jié)論]本研究發(fā)現(xiàn)，酰胺類綴合物3a/4a/17