大鼠彌漫性軸索損傷中小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)iNOS、COX-2的表達(dá).pdf

1、目的：彌漫性軸索損傷（diffuse axonal iniury，DAI）是指在頭部遭受直線加速性或（和）旋轉(zhuǎn)性暴力打擊時(shí)，腦組織由于加速運(yùn)動(dòng)而產(chǎn)生剪切、伸展和壓縮應(yīng)力，導(dǎo)致腦白質(zhì)廣泛發(fā)生以神經(jīng)軸索損傷為特征的一系列病理生理變化。意識(shí)障礙是其典型的表現(xiàn)，臨床診斷較困難，預(yù)后多差。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，彌漫性軸索損傷造成外傷后的腦功能障礙不僅是由于最初的機(jī)械外力對(duì)組織的剪切、積壓等造成的，更是由于損傷后數(shù)小時(shí)甚至數(shù)天中發(fā)生的復(fù)雜的“二次打擊”造

2、成的。以往的研究主要集中在損傷后神經(jīng)元的變化，近年有研究發(fā)現(xiàn)外傷性腦損傷（traumic brain iniury，TBI）后中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的小膠質(zhì)細(xì)胞增生，且隨時(shí)間的變化而變化。
　　 有研究表明，小膠質(zhì)細(xì)胞是第一個(gè)針對(duì)損傷發(fā)生應(yīng)答的細(xì)胞。在短暫性前腦缺血模型中，發(fā)現(xiàn)小膠質(zhì)細(xì)胞的反應(yīng)早在20分鐘內(nèi)即發(fā)生?；罨男∧z質(zhì)細(xì)胞可出現(xiàn)“呼吸爆發(fā)現(xiàn)象”，產(chǎn)生數(shù)量驚人的自由基，引起脂質(zhì)過(guò)氧化，還可引起細(xì)胞成分脂質(zhì)、蛋白之間相互交聯(lián)，損傷神

3、經(jīng)元功能。然而DAI后小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的氧化損傷是否參與神經(jīng)元的遲發(fā)性進(jìn)行性損傷尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　 本實(shí)驗(yàn)采用Marmarou A等人于1994年首次報(bào)道的自由落體撞擊方法復(fù)制大鼠DAI模型，觀察小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)，進(jìn)一步探討DAI后的神經(jīng)組織中神經(jīng)軸索和小膠質(zhì)細(xì)胞的相互作用，為進(jìn)一步闡明DAI的病理生理學(xué)機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠55只，體重260±21g，隨機(jī)

4、分為正常對(duì)照組、假手術(shù)組和損傷組（包括：30min、1h、3h、6h、12h、24h、48h、72h和7d）。正常對(duì)照組大鼠不作處理；假手術(shù)組大鼠給予手術(shù)及打擊前處理，但不予真正的打擊；損傷組大鼠經(jīng)過(guò)手術(shù)后，給予打擊，打擊后按不同時(shí)間處死。觀察打擊后大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)，麻醉灌注后取全腦，制作石蠟切片，采用HE染色和硝酸銀銀染色的方法觀察大鼠腦組織的病理改變。將經(jīng)以上方法驗(yàn)證符合標(biāo)準(zhǔn)的大鼠列入損傷組，用免疫組織化學(xué)的方法測(cè)定腦組織中腦干損傷

5、區(qū)nNOS、iNOS及COX-2表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化。
　　 計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組均數(shù)的比較行單因素方差分析（ANOVA），用最小顯著差法（LSD）作兩兩比較，P<0.05為有顯著性差異。
　　 結(jié)果：1、組織病理學(xué)觀察：
　　 HE染色形態(tài)學(xué)變化：正常對(duì)照組與假手術(shù)對(duì)照組的大鼠腦組織結(jié)構(gòu)清晰，無(wú)充血水腫及其它病理學(xué)改變；損傷組大鼠腦干部位組織充血

6、水腫，變性壞死，24h達(dá)高峰，48h以后水腫有所減輕。
　　 Bielschowsky's鍍銀染色軸索的形態(tài)學(xué)變化：正常對(duì)照組與假手術(shù)對(duì)照組的大鼠腦組織結(jié)構(gòu)清晰，軸索排列整齊，表面光滑；損傷組大鼠打擊后12h可見(jiàn)腦干部位神經(jīng)軸索扭曲、腫脹，呈串珠狀、波浪樣改變，收縮球形成，上述表現(xiàn)于48h及72h更加明顯，7d明顯好轉(zhuǎn)。
　　 2、DAI后腦干β-APP的表達(dá)：正常對(duì)照組與假手術(shù)對(duì)照組大鼠腦干β-APP有弱的表達(dá)。損傷組

7、48h及72h的β-APP表達(dá)量增高，受損軸索直徑增大，在斷裂的軸索周圍可見(jiàn)大量小膠質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 3、DAI后腦干CD11b的表達(dá)：正常對(duì)照組與假手術(shù)對(duì)照組大鼠腦干區(qū)域少量淡染的CD11b陽(yáng)性細(xì)胞，呈棕黃色、分枝狀，胞體小；損傷組活化的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯增加，突起變短、變粗，胞體增大、變圓，染色加深，主要分布于損傷軸索及小血管的周圍。
　　 4、DAI后腦干nNOS的表達(dá)：正常對(duì)照組與假手術(shù)對(duì)照組大鼠腦組織nNOS

8、陽(yáng)性神經(jīng)元細(xì)胞淡染，呈棕黃色；損傷組大鼠打擊后30min即可見(jiàn)nNOS表達(dá)升高，主要分布于損傷軸索區(qū)域的神經(jīng)核團(tuán)，且與對(duì)照組有明顯差異（P<0.05），其表達(dá)量12h至24h達(dá)到峰值，nNOS表達(dá)于24h后開(kāi)始下降，72h后明顯低于12h組，但與對(duì)照組仍然有明顯的差異（P<0.05）。
　　 5、DAI后腦干iNOS的表達(dá)：正常對(duì)照組與假手術(shù)對(duì)照組腦干組織小膠質(zhì)細(xì)胞iNOS弱表達(dá)；損傷組30min即可見(jiàn)軸索損傷區(qū)域小膠質(zhì)細(xì)胞iN

9、OS表達(dá)的升高，與對(duì)照組有明顯差異（P<0.05），72h表達(dá)量增高達(dá)到峰值，7d表達(dá)開(kāi)始下降，較24h有非常明顯的降低，但較對(duì)照組仍有明顯的差異（P<0.05）。
　　 6、DAI后腦干的表達(dá)：正常對(duì)照組與假手術(shù)對(duì)照組腦干組織COX-2弱表達(dá)；損傷組30min即可見(jiàn)軸索損傷區(qū)域小膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元COX-2表達(dá)升高，與對(duì)照組有明顯差異（P<0.05），24h表達(dá)量增高達(dá)到峰值，COX-2表達(dá)于24h后開(kāi)始下降，但與對(duì)照組仍然有明