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文檔簡介
1、目的:
通過免疫熒光、Western Blot,實時定量PCR等方法,研究大鼠彌漫性軸索損傷(diffuse axonal injury, DAI)后海馬CRMP2和p-CRMP2的表達變化。
方法:
1.使用自主設計研制的可同時產(chǎn)生瞬時角加速和線加速運動的致傷裝置(專利號:ZL200920067463.4)建立DAI大鼠模型。
2.利用免疫熒光技術(shù),定性研究正常對照組和DAI后7天組大鼠海馬內(nèi)C
2、RMP2和p-CRMP2的表達。
3.利用Western Blot技術(shù),定量研究正常對照組和DAI后不同時間點大鼠海馬內(nèi)CRMP2和p-CRMP2的表達變化。同時利用實時定量PCR技術(shù),檢測上述各組CRMP2的mRNA表達變化。
結(jié)果:
1.免疫熒光:CRMP2和p-CRMP2在大鼠海馬組織神經(jīng)元中廣泛表達。實驗觀察發(fā)現(xiàn),正常組和DAI后7天組海馬神經(jīng)元中CRMP2和p-CRMP2免疫熒光反應陽性,發(fā)出綠色
3、熒光,胞核發(fā)出藍色熒光。
2.Western Blot和實時定量PCR:CRMP2和p-CRMP2在DAI后不同時間點的海馬組織中均有表達。蛋白水平上:CRMP2在傷后3天、7天的表達較正常對照組明顯降低(p<0.05),但是傷后30天組較正常對照組無明顯差異。mRNA水平上:CRMP2的mRNA在傷后3天、7天的表達較正常對照組明顯降低(p<0.05),但是傷后30天組較正常對照組無明顯差異。蛋白水平上:p-CRMP2在傷后
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