大黃素對(duì)豚鼠胃竇平滑肌細(xì)胞L-型鈣通道電流的影響.pdf

1、目的:胃腸動(dòng)力學(xué)及其疾病的研究是近年迅速發(fā)展起來(lái)的新興科學(xué)，尋找引起胃腸運(yùn)動(dòng)障礙的原因?qū)ο绖?dòng)力障礙性疾病的治療具有重要意義。中藥方劑大承氣湯對(duì)胃動(dòng)力的影響及其參與調(diào)節(jié)胃動(dòng)力機(jī)制的研究尚少，本文的主要目的即研究其主要有效成分大黃素(Emodin)對(duì)豚鼠胃竇平滑肌細(xì)胞膜L-型鈣通道電流(Ica)的影響，以探討其調(diào)控胃腸動(dòng)力的機(jī)制。
　　 方法:采用傳統(tǒng)全細(xì)胞模式的膜片鉗技術(shù)，記錄正常豚鼠胃竇平滑肌細(xì)胞的L-型鈣電流，用Ba2+做

2、載流子記錄Ba2+電流(IBa)，IBa與Ica電流特性相似，可以用IBa代替Ica進(jìn)行研究。分別用含Ba2+的PSS(生理鹽溶液)、10μMEmodinPSS的和20μMEmodinPSS的灌流細(xì)胞，觀察大黃素對(duì)豚鼠胃竇平滑肌細(xì)胞IBa電流峰值的影響、對(duì)IBa的電流-電壓曲線的影響及對(duì)IBa的穩(wěn)態(tài)激活和失活特性的影響，記錄每組均應(yīng)完整記錄六例以上。
　　 結(jié)果:在全細(xì)胞膜片鉗記錄模式下，持續(xù)用含Ba2+的細(xì)胞外液灌流細(xì)胞，將細(xì)

3、胞膜電位鉗制在-80mV，給予時(shí)程為400ms，從-80mV直接階躍到0mV的單一去極化脈沖刺激，且這個(gè)脈沖刺激每隔10s重復(fù)一次。實(shí)驗(yàn)中記錄到多條單一Ica待電流穩(wěn)定后在細(xì)胞外液中加入不同濃度的Emodin。以加藥前的電流作為對(duì)照的結(jié)果顯示，不論是加入10μMEmodin還是20μMEmodin，IBa都可以被顯著激活，表現(xiàn)為IBa電流峰值明顯增大，而且這種激活作用呈現(xiàn)時(shí)間依賴(lài)性。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度Emodin對(duì)I

4、Ba的影響是具有電壓依賴(lài)性的。在細(xì)胞外液中加入10μMEmodin后，在膜電位-10mV～+30mV的電壓范圍內(nèi)均可以明顯的激活I(lǐng)Ba電流（*P＜0.05，**P＜0.01，n=10）;而對(duì)于20μMEmodin，在細(xì)胞外液中加入藥物后，在膜電位-20mV～+40mV的電壓范圍內(nèi)均可以明顯的激活I(lǐng)Ba電流(*P＜0.05，**P＜0.01，n=10)。同時(shí)，10μMEmodin和20μMEmodin對(duì)IBa通道的激活閾值都沒(méi)有顯著影響。

5、
　　 將細(xì)胞膜電位鉗制在-80mV，采用時(shí)程400ms，從-60mV～+60mV，步階電位為10mV的去極化脈沖刺激，即可得到一系列對(duì)應(yīng)于不同膜電位的電流值。使用Boltzmann方程I/Imax=1/{1+exp[(VmVa1/2)/κ]｝對(duì)得到的不同膜電位下的電流比值進(jìn)行曲線擬合，得到給藥前后的穩(wěn)態(tài)激活曲線。其中Va1/2為半數(shù)最大激活電壓，κ為斜坡因子。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)10μMEmodin加入前后，半數(shù)激活電壓Va1/2從-

6、12.91±0.61mV變?yōu)?12.69±0.50mV(n=10，P＞0.05)，斜坡因子κ為6.61±0.53和5.47±0.44(n=10，P＞0.05)。說(shuō)明10μMEmodin對(duì)IBa通道的穩(wěn)態(tài)激活特性沒(méi)有顯著的影響。
　　 細(xì)胞的鉗制電位為-80mV，先給予細(xì)胞時(shí)程為4s的去極化條件脈沖刺激，這個(gè)條件脈沖刺激從-100mV階躍到+40mV，且每次步階電位為20mV，經(jīng)過(guò)條件脈沖刺激后，IBa通道能夠完全處于失活狀態(tài)。條

7、件脈沖刺激后，給予細(xì)胞膜時(shí)程為1s，固定去極化至0mV的測(cè)試脈沖刺激，可得到一系列IBa通道的失活電流。使用Boltzmann方程I/Imax=1/{1+exp[(Vm-Vi1/2)/k]｝對(duì)得到的不同測(cè)試電位下的電流與最大電流的比值(I/Imax)進(jìn)行擬合。其中Vi1/2為半數(shù)失活電壓，κ為斜坡因子。對(duì)Vi1/2進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Emodin加入前后，半數(shù)失活電壓Vi1/2從-27.86±0.76mV變?yōu)?37.23±0.82mV

8、(n=10，P＜0.05)，斜坡因子κ為10.64±0.65和11.73±0.75(n=10，P＞0.05)。說(shuō)明10μMEmodin可以使IBa的穩(wěn)態(tài)失活曲線向電壓的負(fù)方向移動(dòng)，即10μMEmodin加快了IBa通道的失活過(guò)程。
　　 結(jié)論:10μMEmodin和20μMEmodin對(duì)豚鼠胃竇平滑肌細(xì)胞L型鈣通道具有顯著的激活作用，并且這種激活作用具有電壓依賴(lài)性和濃度依賴(lài)性，10μMEmodin對(duì)IBa通道的穩(wěn)態(tài)激活特性沒(méi)有顯