丙泊酚對豚鼠胃竇平滑肌細胞L-型鈣離子通道的作用.pdf

1、目的：研究丙泊酚對豚鼠胃竇平滑肌細胞膜L-型鈣離子通道電流(ICa2+)的影響，探討丙泊酚對胃腸動力的影響。
　　 方法：采用傳統(tǒng)全細胞膜片鉗技術，記錄正常豚鼠胃竇平滑肌細胞膜L-型ICa2+，換Ba2+做載流子后，記錄Ba2+電流(IBa2+)。對照組采用丙泊酚的溶媒成分10％脂肪乳，用Ba2+-PSS稀釋成與78μg/ml丙泊酚同等濃度后灌流細胞，觀察IBa2+變化，然后洗脫，記錄電流圖。丙泊酚組分為低濃度(2μg/ml)和

2、高濃度(78μ,g/ml)組。待正常IBa2+穩(wěn)定后用低濃度丙泊酚溶液灌流細胞，觀察電流隨時間的變化，然后洗脫，觀察跨膜電流是否恢復。同樣，在用高濃度丙泊酚溶液灌流細胞時觀察記錄跨膜IBa2+的變化，然后洗脫，觀察IBa2+是否恢復。每組均應完整記錄三例以上。
　　 結果：首先用Ca2+-PSS灌流細胞，細胞膜電位鉗制在-80mV，脈沖電壓從-60mV開始，去極化刺激到+60mV，階躍電壓10mV，持續(xù)時間400ms，引出Ca2

3、+電流(ICa2+)。ICa2+在-30 mV～-20mV出現(xiàn)，在0 mV達到最大值，電流峰值為(-63.62±19.46)pA，反轉電位在+40mV左右出現(xiàn)。然后用B a2+加載，記錄Ba2+電流(IBa2+)，IBa2+與ICa2+特點相同，也是在-30 mV～-20mV出現(xiàn)，在0 mV達到最大值，電流峰值增大到(-286.63±51.57)pA，反轉電位在+40mV左右出現(xiàn)。持續(xù)用Ba2+-PSS灌流細胞，待IBa2+穩(wěn)定后用與7

4、8μg/ml丙泊酚等容積的10%脂肪乳灌流細胞，觀察到IBa2+沒有顯著變化。持續(xù)用Ba2+-PSS灌流細胞，膜電位鉗制在-80mV，每間隔10s給予細胞一次0mV電壓的單刺激，持續(xù)時間400ms，引發(fā)出IBa2+，待電流穩(wěn)定后用2μg/ml丙泊酚溶液灌流細胞，藥物灌流開始后IBa2+先輕微增大，持續(xù)約30s，然后IBa2+逐漸減小。藥物灌流開始后170s左右IBa2+趨于穩(wěn)定，穩(wěn)定時IBa2+減小到電流最大值的(66.32±4.41)

5、%。待變化穩(wěn)定后用Ba2+-PSS洗脫藥物，電流大小立即開始恢復，恢復電流為加藥前電流最大值的(91.83±1.24)%(n=4)。用78μg/ml丙泊酚溶液灌流細胞，給細胞施加同樣的單刺激，IBa2+隨時間逐漸減小，灌流開始后約190s穩(wěn)定，穩(wěn)定時IBa2+減小到電流最大值的(75.63±3.51)%。然后用Ba2+-PSS洗脫藥物，電流仍然能大部分恢復，恢復電流為加藥前電流值的(94.58±3.19)%(n=3)。
　　 結