MAP3K3介導NF-κB信號通路對卵巢癌生物學行為影響的初步研究.pdf

1、本文分為以下幾個部分進行探討：
　　第一部分 MAP3K3在卵巢癌組織中的表達及臨床意義研究
　　目的：探討MAP3K3在卵巢癌組織中的表達及臨床意義。
　　方法：采用免疫組化染色和熒光實時定量PCR的方法檢測93例卵巢癌和33例輸卵管組織中 MAP3K3的表達情況，并分析其與卵巢癌臨床病理因子的相關性以及預后的關系，探討MAP3K3是否可以作為卵巢癌復發(fā)和預后判讀的參考指標。
　　結果：（1）MAP3K3蛋白表

2、達主要位于細胞漿內，在卵巢癌和輸卵管組織中均有表達，高表達率分別為59.1％（55/93）和30.3%（10/33），但在卵巢癌組織中的表達顯著高于正常輸卵管組織（p<0.05）；（2）MAP3K3 mRNA在卵巢癌組織中的表達豐度顯著高于正常輸卵管組織（p<0.01）；（3）MAP3K3蛋白高表達與卵巢癌組織學類型（p=0.001），組織學級別（p=0.018），疾病發(fā)病模式（(p=0.000）以及化療反應（p=0.009）密切相關，

3、與年齡（p=0.434），F(xiàn)IGO分期（p=0.491）以及腹水（p=0.988）等臨床病理參數(shù)沒有統(tǒng)計學意義（p＞0.05）；（4）應用Kaplan-Meier生存曲線分析發(fā)現(xiàn)高表達MAP3K3蛋白的卵巢癌患者無瘤生存期和總體生存期明顯低于MAP3K3低表達患者（log-rank test, p=0.007和 p=0.001）；用Cox回歸模型進行卵巢癌預后因素篩選發(fā)現(xiàn)，在包括年齡、組織學類型、組織學級別、發(fā)病模式、化療反應、FIGO

4、分期和腹水的多因素分析中，MAP3K3蛋白表達（HR：2.082，95%CI=1.154-3.756， p=0.015）與年齡（HR：4.127，95%CI=1.178-14.461，p=0.027）、化療反應（HR：3.299，95%CI=1.473-7.387，p=0.004）以及FIGO分期（HR：2.038，95%CI=1.083-3.834， p=0.026）一樣，是影響OC患者預后的獨立危險因素。
　　結論：（1）MA

5、P3K3蛋白和mRNA在卵巢癌組織中高表達，且MAP3K3蛋白高表達與卵巢癌的組織學分級、發(fā)病模式、化療反應等臨床病理因子相關；（2）MAP3K3蛋白高表達的卵巢癌患者的無瘤生存期和總體生存期顯著降低，是卵巢癌患者預后差的獨立危險因素。
　　第二部分 MAP3K3介導NF-κB信號通路對卵巢癌生物學行為的影響
　　目的：探討MAP3K3對卵巢癌細胞增殖、凋亡、侵襲與轉移等生物學行為的影響和可能介導的信號通路以及下游調控分子，

6、為進一步闡明MAP3K3基因影響卵巢癌惡性生物學行為的分子機制奠定基礎。
　　方法：；采用Western Blot、熒光實時定量PCR和免疫熒光的方法檢測6株卵巢癌細胞中MAP3K3的表達水平，分別用MAP3K3真核表達載體和MAP3K3特異性干擾表達載體轉染內源性低表達和/或高表達MAP3K3的卵巢癌細胞系，構建MAP3K3穩(wěn)定敲低細胞系和過表達細胞系；通過使用NF-κB信號通路特異性阻斷劑QNZ和運用熒光素酶報告基因實驗，觀察

7、處理前后NF-κB信號通路關鍵因子和EMT相關因子表達的變化情況，采用運用 CCK-8方法檢測干擾前后卵巢癌細胞增殖情況，克隆形成實驗檢測干擾前后細胞克隆形成情況，流式細胞術檢測細胞凋亡，劃痕實驗和Transwell小室實驗檢測遷移和侵襲，免疫熒光檢測 EMT相關蛋白表達和細胞骨架蛋白表達的變化情況。
　　結果：（1）在六株卵巢癌細胞中，MAP3K3的蛋白和mRNA在SKOV3、C13*和A2780中相對高表達，在HeyA8、OV

8、CA433和OV2008中相對低表達。（2）MAP3K3表達下調能夠阻抑TNF-α對NF-κB信號通路的激活效應，敲低MAP3K3后，NF-κB信號通路活性下降，間葉標記物N-cadherin、Vimentin和ICAM1的表達下調，上皮標記物E-cadherin表達上調，過表達MAP3K3后，上述現(xiàn)象逆轉。（3）細胞內功能實驗表明，敲低MAP3K3的表達能在體外抑制卵巢癌細胞增殖、克隆形成、遷移和侵襲能力，并導致細胞自發(fā)凋亡增多，而過