MAP3K3介導(dǎo)NF-κB信號(hào)通路對(duì)卵巢癌生物學(xué)行為影響的初步研究.pdf

1、本文分為以下幾個(gè)部分進(jìn)行探討：
　　第一部分 MAP3K3在卵巢癌組織中的表達(dá)及臨床意義研究
　　目的：探討MAP3K3在卵巢癌組織中的表達(dá)及臨床意義。
　　方法：采用免疫組化染色和熒光實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測(cè)93例卵巢癌和33例輸卵管組織中 MAP3K3的表達(dá)情況，并分析其與卵巢癌臨床病理因子的相關(guān)性以及預(yù)后的關(guān)系，探討MAP3K3是否可以作為卵巢癌復(fù)發(fā)和預(yù)后判讀的參考指標(biāo)。
　　結(jié)果：（1）MAP3K3蛋白表

2、達(dá)主要位于細(xì)胞漿內(nèi)，在卵巢癌和輸卵管組織中均有表達(dá)，高表達(dá)率分別為59.1％（55/93）和30.3%（10/33），但在卵巢癌組織中的表達(dá)顯著高于正常輸卵管組織（p<0.05）；（2）MAP3K3 mRNA在卵巢癌組織中的表達(dá)豐度顯著高于正常輸卵管組織（p<0.01）；（3）MAP3K3蛋白高表達(dá)與卵巢癌組織學(xué)類(lèi)型（p=0.001），組織學(xué)級(jí)別（p=0.018），疾病發(fā)病模式（(p=0.000）以及化療反應(yīng)（p=0.009）密切相關(guān)，

3、與年齡（p=0.434），F(xiàn)IGO分期（p=0.491）以及腹水（p=0.988）等臨床病理參數(shù)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）；（4）應(yīng)用Kaplan-Meier生存曲線分析發(fā)現(xiàn)高表達(dá)MAP3K3蛋白的卵巢癌患者無(wú)瘤生存期和總體生存期明顯低于MAP3K3低表達(dá)患者（log-rank test, p=0.007和 p=0.001）；用Cox回歸模型進(jìn)行卵巢癌預(yù)后因素篩選發(fā)現(xiàn)，在包括年齡、組織學(xué)類(lèi)型、組織學(xué)級(jí)別、發(fā)病模式、化療反應(yīng)、FIGO

4、分期和腹水的多因素分析中，MAP3K3蛋白表達(dá)（HR：2.082，95%CI=1.154-3.756， p=0.015）與年齡（HR：4.127，95%CI=1.178-14.461，p=0.027）、化療反應(yīng)（HR：3.299，95%CI=1.473-7.387，p=0.004）以及FIGO分期（HR：2.038，95%CI=1.083-3.834， p=0.026）一樣，是影響OC患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　結(jié)論：（1）MA

5、P3K3蛋白和mRNA在卵巢癌組織中高表達(dá)，且MAP3K3蛋白高表達(dá)與卵巢癌的組織學(xué)分級(jí)、發(fā)病模式、化療反應(yīng)等臨床病理因子相關(guān)；（2）MAP3K3蛋白高表達(dá)的卵巢癌患者的無(wú)瘤生存期和總體生存期顯著降低，是卵巢癌患者預(yù)后差的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　第二部分 MAP3K3介導(dǎo)NF-κB信號(hào)通路對(duì)卵巢癌生物學(xué)行為的影響
　　目的：探討MAP3K3對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲與轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的影響和可能介導(dǎo)的信號(hào)通路以及下游調(diào)控分子，

6、為進(jìn)一步闡明MAP3K3基因影響卵巢癌惡性生物學(xué)行為的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　方法：；采用Western Blot、熒光實(shí)時(shí)定量PCR和免疫熒光的方法檢測(cè)6株卵巢癌細(xì)胞中MAP3K3的表達(dá)水平，分別用MAP3K3真核表達(dá)載體和MAP3K3特異性干擾表達(dá)載體轉(zhuǎn)染內(nèi)源性低表達(dá)和/或高表達(dá)MAP3K3的卵巢癌細(xì)胞系，構(gòu)建MAP3K3穩(wěn)定敲低細(xì)胞系和過(guò)表達(dá)細(xì)胞系；通過(guò)使用NF-κB信號(hào)通路特異性阻斷劑QNZ和運(yùn)用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)，觀察

7、處理前后NF-κB信號(hào)通路關(guān)鍵因子和EMT相關(guān)因子表達(dá)的變化情況，采用運(yùn)用 CCK-8方法檢測(cè)干擾前后卵巢癌細(xì)胞增殖情況，克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)干擾前后細(xì)胞克隆形成情況，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡，劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)遷移和侵襲，免疫熒光檢測(cè) EMT相關(guān)蛋白表達(dá)和細(xì)胞骨架蛋白表達(dá)的變化情況。
　　結(jié)果：（1）在六株卵巢癌細(xì)胞中，MAP3K3的蛋白和mRNA在SKOV3、C13*和A2780中相對(duì)高表達(dá)，在HeyA8、OV

8、CA433和OV2008中相對(duì)低表達(dá)。（2）MAP3K3表達(dá)下調(diào)能夠阻抑TNF-α對(duì)NF-κB信號(hào)通路的激活效應(yīng)，敲低MAP3K3后，NF-κB信號(hào)通路活性下降，間葉標(biāo)記物N-cadherin、Vimentin和ICAM1的表達(dá)下調(diào)，上皮標(biāo)記物E-cadherin表達(dá)上調(diào)，過(guò)表達(dá)MAP3K3后，上述現(xiàn)象逆轉(zhuǎn)。（3）細(xì)胞內(nèi)功能實(shí)驗(yàn)表明，敲低MAP3K3的表達(dá)能在體外抑制卵巢癌細(xì)胞增殖、克隆形成、遷移和侵襲能力，并導(dǎo)致細(xì)胞自發(fā)凋亡增多，而過(guò)