生長抑素及其受體(ssts)在大鼠視網(wǎng)膜無長突細胞上的表達以及對其突觸前活動的調(diào)節(jié).pdf

1、生長抑素(somatostatin，SRIF)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system，CNS)中的一種神經(jīng)活性肽，通過激活5種特異的受體亞型(sst1-5)行使其功能，可作為遞質(zhì)或調(diào)質(zhì)起作用。在視網(wǎng)膜中，SRIF主要位于無長突細胞(amacrine cell，AC)上。已有文獻表明，sst1-4在視網(wǎng)膜中均有表達，但在視網(wǎng)膜中僅有較低水平的sst5mRNA表達。在本工作中，我們研究了sst5在大鼠視網(wǎng)膜AC上的表達

2、。此外，由于缺少特異性受體拮抗劑(除sst2外)，有關不同SRIF受體亞型在神經(jīng)元上生理功能的研究報道還很少。近年來，隨著特異性sst5拮抗劑的發(fā)現(xiàn)，為我們研究sst5在視網(wǎng)膜中的功能提供了可能性。
　　 在本工作中，我們首次報道了生長抑素受體5亞型(sst5)在大鼠視網(wǎng)膜AC上的表達，并進一步研究了SRIF對培養(yǎng)的大鼠視網(wǎng)膜GABA能AC突觸前抑制性遞質(zhì)釋放的調(diào)節(jié)。
　　 應用免疫細胞化學方法，我們首先研究了sst5在

3、大鼠視網(wǎng)膜AC上的表達。sst5的免疫標記彌散地遍布整個內(nèi)網(wǎng)狀層，并在內(nèi)網(wǎng)狀層遠端形成兩條明顯的熒光亮帶。免疫雙標實驗顯示，sst5表達在GABA能AC上。進一步的雙標實驗顯示，sst5在酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase，TH)標記的多巴胺能AC和膽堿乙?；D移酶(choline acetyl-transferase，ChAT)標記的膽堿能AC上均有表達。免疫陽性標記主要出現(xiàn)在這些細胞的細胞膜和胞體-突起連接部。在

4、膽堿能AC的位于內(nèi)網(wǎng)狀層的突起上也能觀察到很弱的sst5標記。相反，在被Ca2+結合蛋白parvalbumin(PV)標記的甘氨酸能AⅡ型AC上并沒有sst5的陽性標記。此外，SRIF與sst5在多巴胺能和膽堿能AC上共表達。這些結果提示，sst5在視網(wǎng)膜AC上可能作為自身受體和/或常規(guī)受體起作用。
　　 應用全細胞膜片鉗記錄技術，我們進一步研究了SRIF對培養(yǎng)的大鼠視網(wǎng)膜GABA能AC突觸前活動的調(diào)節(jié)。結果發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)GABA

5、能AC上可記錄到微小抑制性突觸后電流(miniature inhibitory postsynaptic current，mIPSC)，該電流可被GABAA受體特異性拮抗劑bicuculline(10μM)完全抑制，說明mIPSC是由突觸后GABAA受體介導的。在此基礎上，我們觀察到1μM SRIF明顯壓抑mIPSC的頻率，該壓抑作用可被sst5和sst2的特異拮抗劑部分阻斷，說明SRIF是通過激活突觸前sst5和/或sst2起作用。盡

6、管SRIF略微壓抑mIPSC的平均幅度，但并不改變mIPSC的動力學特性，如上升時間(rist time)和衰減時間(decay time)。提高胞外Ca2+濃度增加mIPSC的頻率，而在胞外高鈣條件下，mIPSC頻率同樣可被1μM SRIF明顯壓抑。在去除胞外Ca2+的情況下，mIPSC幾乎被完全壓抑，說明mIPSC對胞外Ca2+有依賴性。進一步研究發(fā)現(xiàn)，200μM CdCl2阻斷絕大部分mIPSC，提示電壓門控Ca2+通道在其中起重

7、要作用，因此，我們研究了L型Ca2+通道阻斷劑nimodipine的作用，發(fā)現(xiàn)10μM nimodipine明顯壓抑mIPSC，提示突觸前L型Ca2+通道與mIPSC密切相關。此外，5μM forskolin(腺苷酸環(huán)化酶激活物)增加mIPSC的頻率，而PKA的特異性抑制劑Rp-cAMP(20μM)降低mIPSC的頻率。在Rp-cAMP存在的情況下，SRIF對mIPSC不再有壓抑作用。這些結果提示，SRIF激活特異性受體后可能抑制cAM