生長(zhǎng)抑素及其受體(ssts)在大鼠視網(wǎng)膜無(wú)長(zhǎng)突細(xì)胞上的表達(dá)以及對(duì)其突觸前活動(dòng)的調(diào)節(jié).pdf

1、生長(zhǎng)抑素(somatostatin，SRIF)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system，CNS)中的一種神經(jīng)活性肽，通過(guò)激活5種特異的受體亞型(sst1-5)行使其功能，可作為遞質(zhì)或調(diào)質(zhì)起作用。在視網(wǎng)膜中，SRIF主要位于無(wú)長(zhǎng)突細(xì)胞(amacrine cell，AC)上。已有文獻(xiàn)表明，sst1-4在視網(wǎng)膜中均有表達(dá)，但在視網(wǎng)膜中僅有較低水平的sst5mRNA表達(dá)。在本工作中，我們研究了sst5在大鼠視網(wǎng)膜AC上的表達(dá)

2、。此外，由于缺少特異性受體拮抗劑(除sst2外)，有關(guān)不同SRIF受體亞型在神經(jīng)元上生理功能的研究報(bào)道還很少。近年來(lái)，隨著特異性sst5拮抗劑的發(fā)現(xiàn)，為我們研究sst5在視網(wǎng)膜中的功能提供了可能性。
　　 在本工作中，我們首次報(bào)道了生長(zhǎng)抑素受體5亞型(sst5)在大鼠視網(wǎng)膜AC上的表達(dá)，并進(jìn)一步研究了SRIF對(duì)培養(yǎng)的大鼠視網(wǎng)膜GABA能AC突觸前抑制性遞質(zhì)釋放的調(diào)節(jié)。
　　 應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法，我們首先研究了sst5在

3、大鼠視網(wǎng)膜AC上的表達(dá)。sst5的免疫標(biāo)記彌散地遍布整個(gè)內(nèi)網(wǎng)狀層，并在內(nèi)網(wǎng)狀層遠(yuǎn)端形成兩條明顯的熒光亮帶。免疫雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)顯示，sst5表達(dá)在GABA能AC上。進(jìn)一步的雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)顯示，sst5在酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase，TH)標(biāo)記的多巴胺能AC和膽堿乙?；D(zhuǎn)移酶(choline acetyl-transferase，ChAT)標(biāo)記的膽堿能AC上均有表達(dá)。免疫陽(yáng)性標(biāo)記主要出現(xiàn)在這些細(xì)胞的細(xì)胞膜和胞體-突起連接部。在

4、膽堿能AC的位于內(nèi)網(wǎng)狀層的突起上也能觀察到很弱的sst5標(biāo)記。相反，在被Ca2+結(jié)合蛋白parvalbumin(PV)標(biāo)記的甘氨酸能AⅡ型AC上并沒(méi)有sst5的陽(yáng)性標(biāo)記。此外，SRIF與sst5在多巴胺能和膽堿能AC上共表達(dá)。這些結(jié)果提示，sst5在視網(wǎng)膜AC上可能作為自身受體和/或常規(guī)受體起作用。
　　 應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗記錄技術(shù)，我們進(jìn)一步研究了SRIF對(duì)培養(yǎng)的大鼠視網(wǎng)膜GABA能AC突觸前活動(dòng)的調(diào)節(jié)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)GABA

5、能AC上可記錄到微小抑制性突觸后電流(miniature inhibitory postsynaptic current，mIPSC)，該電流可被GABAA受體特異性拮抗劑bicuculline(10μM)完全抑制，說(shuō)明mIPSC是由突觸后GABAA受體介導(dǎo)的。在此基礎(chǔ)上，我們觀察到1μM SRIF明顯壓抑mIPSC的頻率，該壓抑作用可被sst5和sst2的特異拮抗劑部分阻斷，說(shuō)明SRIF是通過(guò)激活突觸前sst5和/或sst2起作用。盡

6、管SRIF略微壓抑mIPSC的平均幅度，但并不改變mIPSC的動(dòng)力學(xué)特性，如上升時(shí)間(rist time)和衰減時(shí)間(decay time)。提高胞外Ca2+濃度增加mIPSC的頻率，而在胞外高鈣條件下，mIPSC頻率同樣可被1μM SRIF明顯壓抑。在去除胞外Ca2+的情況下，mIPSC幾乎被完全壓抑，說(shuō)明mIPSC對(duì)胞外Ca2+有依賴性。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，200μM CdCl2阻斷絕大部分mIPSC，提示電壓門控Ca2+通道在其中起重

7、要作用，因此，我們研究了L型Ca2+通道阻斷劑nimodipine的作用，發(fā)現(xiàn)10μM nimodipine明顯壓抑mIPSC，提示突觸前L型Ca2+通道與mIPSC密切相關(guān)。此外，5μM forskolin(腺苷酸環(huán)化酶激活物)增加mIPSC的頻率，而PKA的特異性抑制劑Rp-cAMP(20μM)降低mIPSC的頻率。在Rp-cAMP存在的情況下，SRIF對(duì)mIPSC不再有壓抑作用。這些結(jié)果提示，SRIF激活特異性受體后可能抑制cAM