法舒地爾對(duì)糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化大鼠內(nèi)皮功能影響的研究.pdf

1、目的：
　　 建立糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化大鼠內(nèi)皮功能障礙模型，研究Rho激酶與內(nèi)皮功能障礙之間的關(guān)系，探討Rho激酶抑制劑法舒地爾對(duì)內(nèi)皮功能的影響。
　　 方法：及內(nèi)容：
　　 1、實(shí)驗(yàn)分組
　　 健康雄性WISTA大鼠25只，6-8周齡，200-220g，隨機(jī)選取5只，作為正常對(duì)照組(NC組)，余20只建立糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化模型后隨機(jī)均分成陽(yáng)性對(duì)照組（PC組）和藥物干預(yù)組（DI組）。
　　

2、2、造模方法
　　 采用尾靜脈注射鏈脲佐菌素(STZ)制備糖尿病大鼠，此基礎(chǔ)上維生素D3灌胃3天，同時(shí)給予高脂飼料喂養(yǎng)5周后，糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化大鼠模型建立成功。
　　 3、藥物干預(yù)
　　 20只大鼠模型建立后隨機(jī)分成陽(yáng)性對(duì)照組和藥物干預(yù)組2組:陽(yáng)性對(duì)照組繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)，同時(shí)予以生理鹽水腹腔注射，共4周;藥物干預(yù)組繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)，同時(shí)予以予以法舒地爾10mg/kg/d腹腔注射，共4周。
　　 4、

3、標(biāo)本留取
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血5ml，靜置1小時(shí)，2500bp離心10min，取上清液分裝4管，每管50-70ul，留1管立即測(cè)血糖，余-80℃冷柜保存;剪下心臟，取左心室，洗凈血液，于甲醛中固定;取主動(dòng)脈組織約100mg兩塊，洗凈血液，分裝兩管，于-80℃冷柜保存;另取主動(dòng)脈組織2.0×2.0×0.3cm大小，洗凈血液，于甲醛中固定。
　　 5、檢測(cè)指標(biāo)
　　 血糖儀測(cè)全血血糖;酶法測(cè)血清血

4、脂(LDL-C、TC、TG、HDL-C); HE染色觀察病理組織結(jié)構(gòu);ELISA技術(shù)測(cè)內(nèi)皮功能指標(biāo)eNOS、ET-1; western blot技術(shù)測(cè)ROCK底物蛋白MYPT-1的磷酸化水平;RT-PCR技術(shù)測(cè)定RhoA及ROCK的mRNA表達(dá)水平。
　　 所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。所有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)用SPSS19.0軟件分析，取P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、血液生化指標(biāo)
　　

5、 PC組與NC組相比，血糖明顯升高（26.36±3.25 vs6.18±1.14，p＜0.05）;TG明顯升高（1.82±0.10vs1.01±0.10，p＜0.05），TC明顯升高(7.64土1.031 vs2.67±0.21,p＜0.05)，LDL-C明顯升高（6.14±1.22 vs1.09±0.18，p＜0.05）;ET-1表達(dá)明顯升高（88.2±5.3 vs72.1±7.1，p＜0.05），eNOS的表達(dá)明顯減低(17.4±1

6、.8vs24.4±2.5，p＜0.05)。DI組與PC組相比，血糖明顯減低（17.70±2.69vs26.36±3.25，p＜0.05）;TG明顯減低（1.56±0.139vs1.82±0.096， p＜0.05）、TC明顯減低（6.26±0.43vs7.64±1.03，p＜0.05），LDL-C明顯減低(4.76±0.57vs6.14±1.22, p＜0.05);ET-1的表達(dá)減低（75.5±2.9 vs88.2±5.3，p＜0.05

7、），eNOS的表達(dá)明顯升高(22.8±2.3vs17.4±1.8,p＜0.05)。
　　 2、病理組織形態(tài)學(xué)
　　 NC組主動(dòng)脈形態(tài)正常，內(nèi)皮細(xì)胞連接緊密，無(wú)脂質(zhì)條紋或纖維斑塊，內(nèi)膜完整，無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn);PC組動(dòng)脈內(nèi)膜細(xì)胞腫脹向內(nèi)突出，有程度不等的增厚，內(nèi)膜下可見(jiàn)空泡，增厚內(nèi)膜主要由大量泡沫細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞組成，內(nèi)膜下發(fā)生廣泛粥糜樣改變，外膜下炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，內(nèi)皮細(xì)胞損傷脫落，脂質(zhì)沉積，斑塊形成;DI組主動(dòng)脈內(nèi)膜略腫脹，稍

8、增厚，泡沫細(xì)胞較少，無(wú)明顯內(nèi)皮細(xì)胞脫落。
　　 3、Western blot結(jié)果
　　 PC組與NC組比較，ROCK1底物蛋白MYPT-1的磷酸化水平明顯升高（1.70±0.60 vs0.5±0.28，p＜0.05）;DI組與PC組比較，p-MYPT-1的表達(dá)明顯減低（0.82±0.45 vs1.70±0.60,p＜0.05）。
　　 4、RT-PCR結(jié)果
　　 PC組與NC組比較，RhoA及ROCK的m

9、RNA水平明顯升高（0.83±0.12 vs0.16±0.20，0.78±0.13 vs0.4±0.18，p＜0.05）;DI組與PC組比較，RhoA及ROCK的mRNA水平明顯減低（0.25±0.07 vs0.83±0.12，0.40±0.08vs0.78±0.13，p＜0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1、Rho激酶在糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮中高表達(dá)。
　　 2、Rho激酶與主動(dòng)脈內(nèi)皮功能密切相關(guān)