糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化對(duì)雷帕霉素抵抗的分子機(jī)制研究.pdf

1、研究目的:
　　本研究以載脂蛋白E基因缺陷(APOE-/-)小鼠為基礎(chǔ)構(gòu)建糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化的動(dòng)物模型，對(duì)比該模型與單純動(dòng)脈粥樣硬化模型在血脂血糖、粥樣斑塊面積、斑塊組成、斑塊內(nèi)蛋白的表達(dá)、主動(dòng)脈平滑肌中蛋白表達(dá)的差異，從而揭示對(duì)雷帕霉素抵抗的分子機(jī)制。
　　研究背景:
　　糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病率和病死率逐年升高，雷帕霉素洗脫支架雖然能有效地降低支架植入術(shù)后的血管再狹窄，但在糖尿病人群中使用雷帕霉素洗脫支架

2、后的血管再狹窄率明顯高于非糖尿病人群，提示雷帕霉素抵抗可能是糖尿病患者再狹窄的重要原因。
　　研究方法:
　　1、構(gòu)建并評(píng)價(jià)幾種不同的糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型。采用SPF級(jí)8周齡雄性APOE-/-小鼠46只，隨機(jī)分組為對(duì)照組、高脂組、STZ(鏈脲佐菌素Streptozotocin)低劑量組、STZ高劑量組。對(duì)照組喂以普通飼料，高脂組喂以高脂飼料，STZ低劑量組給予腹腔注射STZ55mg/kg(連續(xù)注射5天)，STZ高劑

3、量組給予腹腔注射STZ200mg/kg(單次注射)。2個(gè)月后檢測(cè)空腹血糖、血脂及主動(dòng)脈根部斑塊面積，評(píng)價(jià)各種方法的優(yōu)劣。
　　2、糖尿病對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化小鼠粥樣斑塊和血管平滑肌中mTOR及其下游靶蛋白表達(dá)和活化的影響。采用SPF級(jí)8周齡雄性APOE-/-小鼠16只，隨機(jī)分為糖尿病組和對(duì)照組。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，糖尿病組腹腔注射STZ55mg/kg(連續(xù)注射5天)，對(duì)照組腹腔注射相同體積的檸檬酸緩沖液，監(jiān)測(cè)血糖，空腹血糖＞13mmol/

4、L視為糖尿病建模成功。2月后空腹測(cè)體重，采血并處死后，檢測(cè)空腹血糖、血脂，測(cè)量主動(dòng)脈根部斑塊面積，免疫組化檢測(cè)主動(dòng)脈根部斑塊內(nèi)α-actin、mTOR的表達(dá)， western-blot檢測(cè)主動(dòng)脈平滑肌中mTOR、p-mTOR、p-4EBP1、p-S6K1的表達(dá)。
　　研究結(jié)果:
　　1、STZ高劑量組出現(xiàn)高死亡率;STZ低劑量組空腹血糖、血脂、主動(dòng)脈根部斑塊面積均高于對(duì)照組和高脂組(P＜0.01);高脂組空腹血糖輕度升高(7

5、.78±0.67mmol/L)。
　　2、糖尿病組較對(duì)照組的空腹血糖、血脂明顯升高(P＜0.01)，主動(dòng)脈根部斑塊面積明顯增加(P＜0.01)，斑塊中平滑肌細(xì)胞的含量增加(P＜0.01)。糖尿病組較對(duì)照組斑塊內(nèi)mTOR的表達(dá)減少。糖尿病組較對(duì)照組主動(dòng)脈平滑肌內(nèi)mTOR、p-mTOR、p-4EBP1、p-S6K1的表達(dá)均顯著減少(P＜0.01)。
　　研究結(jié)論:
　　1、APOE-/-小鼠多次腹腔內(nèi)小劑量(55mg/kg