食管鱗癌放射抗拒細(xì)胞株蛋白指紋圖譜特征的實驗研究.pdf

1、目的：探討食管鱗狀細(xì)胞癌(ECa109)放射抗拒細(xì)胞株特征性蛋白指紋圖譜，為進(jìn)一步開展臨床研究提供依據(jù)。
　　方法：
　　1.確定食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株ECa109的亞致死劑量射線。
　　2.構(gòu)建食管鱗狀細(xì)胞癌放射抗拒細(xì)胞株模型。食管鱗狀細(xì)胞癌放射抗拒細(xì)胞株ECa109-IR是用亞致死劑量放射線反復(fù)照射法獲得的，ECa109-IR來源于食管鱗癌細(xì)胞株ECa109，是ECa109接受5次亞致死劑量射線后存活的第五代亞克隆細(xì)

2、胞。
　　3.檢測食管鱗癌放射抗拒細(xì)胞株ECa109-IR的放射敏感性?？寺∩嬖囼?、細(xì)胞增殖試驗和流式細(xì)胞術(shù)比較ECa109-IR和ECa109的放射敏感性。
　　4.測差異蛋白譜——用蛋白指紋圖譜技術(shù)檢測放射抗拒細(xì)胞株ECa109-IR與放射敏感細(xì)胞株ECa109之間差異的蛋白譜。
　　結(jié)果：
　　1、建立食管鱗狀細(xì)胞癌放射抗拒細(xì)胞株ECa109-IR。ECa109-IR為ECa109接受亞致死劑量射線反復(fù)5

3、次照射后，存活的第五代亞克隆細(xì)胞株為放射抗拒細(xì)胞株ECa109-IR。
　　2、ECa109-IR細(xì)胞的放射抗拒性分析。
　　a.克隆生存實驗結(jié)果顯示ECa109-IR的存活克隆比ECa109的更大、數(shù)量更多，表現(xiàn)為放射抗拒。ECa109-IR的劑量存活曲線下降趨勢比ECa109慢。從而證實ECa109-IR的放射抗拒性明顯高于ECa109，ECa109-IR的放射抗拒性強。
　　b.細(xì)胞增值實驗射線對放射抗拒細(xì)胞株E

4、Ca109-IR的生長影響效應(yīng)較小，射線照射后細(xì)胞恢復(fù)時間短、增長快。
　　c.流式細(xì)胞術(shù) G0/G1的百分率：ECa109-IR和ECa109無明顯差異，S期的百分率：ECa109-IR比ECa109高，G2/M期的百分率：ECa109-IR比ECa109低，表明ECa109-IR細(xì)胞放射誘導(dǎo)的G1/S和G2/M期阻滯的作用在明顯弱于ECa109，這與典型的放射抗拒表型一致。該實驗表明，放射誘導(dǎo)的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)在放射抗拒細(xì)胞株EC

5、a109-IR發(fā)生了改變。
　　3.ECa109-IR和ECa109蛋白指紋圖譜：ECa109-IR細(xì)胞和ECa109細(xì)胞的蛋白質(zhì)荷比峰存在明顯差異（P<0.05的差異峰為21個，P<0.01的差異峰為19個），差異峰的M/Z幾乎均在6000以內(nèi)，其中以M/Z在2000-6000最多見。以上顯示ECa109-IR細(xì)胞和ECa109細(xì)胞蛋白圖譜存在差異，即兩者之間存在差異蛋白，這些蛋白極有可能為決定ECa109-IR和ECa109放