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文檔簡介
1、研究背景:
胰島素樣生長因子結合蛋白相關蛋白1(insulin-like growth-factor binding protein-relatedprotein 1,IGFBPrP1)是一種可溶性細胞黏附糖蛋白,由腫瘤細胞、血管內皮細胞、平滑肌細胞和成纖維細胞等多種細胞分泌,Lopez-Bermejo等和Ma等的研究發(fā)現IGFBPrP1蛋白廣泛表達于人體各種組織細胞并起著相當重要的作用,能夠調節(jié)上皮細胞和纖維母細胞生長、
2、增殖、黏附,促進血管形成,刺激內皮細胞產生前列環(huán)素,誘導細胞凋亡等多種功能。
目前有關IGFBPrP1蛋白功能尚不是完全清楚。導師劉立新課題研究小組發(fā)現:用重組IGFBPrP1能使體外培養(yǎng)的肝星狀細胞株HSC-T6 活化,且在一定的劑量范圍內隨著IGFBPrP1劑量的增加HSC的活化程度逐漸增強;抗IGFBPrP1抗體通過抑制肝纖維化小鼠肝臟HSC的活化、減少ECM的生成及減少肝細胞的凋亡等途徑發(fā)揮抗纖維化作用。
3、 IGFBPrP1可促進體外培養(yǎng)的肝星狀細胞過表達TGF-β1及細胞外基質,增多的細胞外基質是由TGF β1通過Smad3信號通路介導的。IGFBPrP1可能是肝纖維化發(fā)生發(fā)展過程中的一種新的因子。
IGFBPrP1的生物學功能還有待進一步研究:一方面,腹腔注射動物給藥IGFBPrP1半衰期短,有藥物濃度高峰,代謝快,不能真正了解IGFBPrP1蛋白的功能;另一方面,IGFBPrP1有致肝纖維化的作用,對其他臟器是否也
4、有影響及其可能機制是什么也尚未明確。為了闡明此問題,設計了本課題。
目的:
比較IGFBPrP1對小鼠肝、肺組織作用的異同,探討IGFBPrP1對小鼠肝、肺組織的影響及其可能機制。
方法:
24只3周齡SPF級雄性C57 BL/6 野生型小鼠,體重(12±2)g,由中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所提供。隨機分為3組:手術組(8只)用1%水合氯醛麻備小鼠,于小鼠后背部皮下行一0.5 厘米
5、左右橫切口,組織鉗由切口處皮下向小鼠后背部撐出一個膠囊大小的空間(空間應大到膠囊泵體可以有一定移動度,但不能讓泵體輕易滑到小鼠側翼),行手術植入注滿100μg/ml IGFBPrP1溶液的膠囊滲透壓泵(輸藥管釋出口要朝內塞入皮下,不可反向以致釋出口剛好在傷口之下)。膠囊泵連續(xù)恒定釋放IGFBPrP1溶液,泵容積90μl,泵速0.11μl/h,持續(xù)4周。假手術組(8只)行單純對照手術切開縫合不植入膠囊泵,正常組(8只)不作處理。在第4周末
6、禁食10h后,乙醚麻醉采集肝、肺組織用10%中性甲醛固定,石蠟包埋,切片。(1)分別對肝、肺組織石蠟切片做HE 染色和苦味酸-天狼猩紅染色觀察肝、肺組織病理變化及膠原纖維形成情況;(2)免疫組織化學染色檢測肝、肺組織中IGFBPrP1、Ⅲ型膠原(Collagen Ⅲ)、Smad3及p-Smad2/3的表達;(3)TUNEL 法檢測各組肝組織中肝細胞凋亡情況。
結果:
(1)苦味酸-天狼猩紅染色結果:手術組肝組
7、織中膠原纖維含量較正常組和假手術組明顯增多(0.46%±0.09%vs1.27.%±0.10%,0.45%±0.08%vs1.27.%±0.10%,F=597.797,P<0.01),手術組肺組織中膠原纖維含量較其他兩組差異不明顯(0.35%±0.09%vs0.36%±0.12%,0.37%±0.12%vs0.36%±0.12%,F=0.344,P>0.05)。
(2)免疫組織化學染色結果:手術組肝組織中IGFBPrP1、
8、Ⅲ型膠原(Collagen Ⅲ)及p-Smad2/3的表達均較正常組和假手術組顯著增強,Smad3表達未見增強。(IGFBPrP1:0.26±0.04vs1.77±0.64,0.25±0.04vs1.77±0.64,F=44.064,P<0.01;Collagen Ⅲ:0.45±0.04vs2.59±0.29,0.43±0.05vs2.59±0.29,F=431.641,P<0.01;p-Smad2/3:0.53±0.07vs2.44±
9、0.32,0.51±0.08vs2.44±0.32,F=114.251,P<0.01;Smad3:0.29±0.06vs0.33±0.04,0.34±0.04vs0.33±0.04,F=1.928,P>0.05)。手術組肺組織中IGFBPrP1、Ⅲ型膠原(CollagenⅢ)、Smad3及p-Smad2/3的表達較其他兩組差異不明顯(IGFBPrP1:0.32±0.05vs0.30±0.07,0.29±0.06vs0.30±0.07,F
10、=0.505,P>0.05;Collagen Ⅲ:0.93±0.07vs0.89±0.02,0.85±0.01vs0.89±0.02,F=0.973,P>0.05;Smad3:0.26±0.03vs0.25±0.04,0.24±0.09vs0.25±0.04,F=0.150,P>0.05;p-Smad2/3:0.25±0.06vs0.26±0.05,0.28±0.06vs0.26±0.05,F=0.255,P>0.05)。
11、 (3)TUNEL 法檢測肝細胞凋亡結果:熒光顯微鏡下和普通光鏡下手術組肝組織中凋亡肝細胞較正常組和假手術組明顯增多(6.21%±2.83%vs34.14%±11.04%,7.13%±2.59%vs34.14%±11.04%,F=114.251,P<0.01;6.10%±2.23%vs32.23%±10.60%,5.71%±2.87%vs32.23%±10.60%,F=114.251,P<0.01)。
結論:
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