IGFBPrP1對小鼠肝組織的影響及其機制的研究.pdf

1、研究背景：胰島素樣生長因子結合蛋白相關蛋白1(insulin-like growth-factor binding protein-relatedprotein1，IGFBPrP1)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種可溶性分泌蛋白，導師劉立新已有的研究發(fā)現(xiàn)：在肝纖維化、肝硬化患者肝組織中IGFBPrP1的表達較正常對照組明顯增強[1]；在體外培養(yǎng)的肝星狀細胞(hepatocyte stellate cell，HSC)中加入IGFBPrP1可使其合成細胞

2、外基質(extracellular matrix，ECM)增多[2]；用抗IGFBPrP1抗體可逆轉由TGFβ1誘導的HSC產(chǎn)生的過多的Ⅰ型膠原(CollagenⅠ)[3]；抗IGFBPrP1抗體可通過抑制肝纖維化小鼠HSC的活化、減少ECM的主要成分CollagenⅠ與纖維連接蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)的合成及減少肝細胞的凋亡等途徑發(fā)揮抗纖維化作用[4]。以上研究結果表明IGFBPrP1可能是肝纖維化發(fā)生機制中新的致病因子。

3、
　　 那么，IGFBPrP1是否對肝臟具有直接的致纖維化作用昵?其作用機制為何?目前尚無研究報道。為了闡明此問題，設計了本課題。
　　 目的：明確外源性胰島素樣生長因子結合蛋白相關蛋白1(IGFBPrP1)對在體肝組織的影響，并探討其可能的機制。
　　 方法：24只雄性C57BL/6野生型小鼠隨機分為3組：正常對照組(8只)，腹腔注射等量磷酸鹽緩沖液；rmIGFBPrP12周組(8只)，腹腔注射rmIGFBPr

4、P1，0.015mg/kg，每周7次，持續(xù)2周；rmIGFBPrP14周組(8只)，腹腔注射rmIGFBPrP1，0.015mg/kg，每周7次，持續(xù)4周。分別在第2周、4周末處死小鼠。(1)取肝組織，肉眼觀察肝組織大體形態(tài)；(2)分別對肝組織石蠟切片做HE染色和苦味酸-天狼猩紅染色觀察肝組織病理變化及膠原纖維形成情況；(3)免疫組織化學染色檢測肝組織中Ⅲ型膠原(CollagenⅢ)、轉化生長因子β1(transforming grow

5、th factorβ1，TGFβ1)、Smad3及p-Smad2/3的表達；(4)Westernblot檢測肝組織中IGFBPrP1、纖維連接蛋白(Fibronectin，F(xiàn)N)、Ⅰ型膠原(CollagenⅠ)、TGFβ1、Smad3及p-Smad2/3的相對表達量，并進行IGFBPrP1與其他各指標的相關性分析。
　　 結果：
　　 (1)苦味酸-天狼猩紅染色分析結果：肝組織中膠原含量在rmIGFBPrP12周組較正常

6、對照組明顯增多，rmIGFBPrP14周組較2周組明顯增多(0.45％±0.15％ vs0.21％±0.11％，1.02％±0.33％ vs0.45％±0.15％，P＜0.05)。
　　 (2)免疫組織化學染色結果顯示：rmIGFBPrP12周組及4周組肝組織中CollagenⅢ、TGFβ1、Smad3及p-Smad2/3的表達均較正常對照組顯著增強，且4周組上述蛋白表達量較2周組高(CollagenⅢ：F=221.858，P＜

7、0.01；TGFβ1：F=280.571，P＜0.01；Smad3：F=292.114，P＜0.01；p-Smad2/3：F=114.251，P＜0.01)。
　　 (3)Western blot檢測結果顯示：rmIGFBPrP12周組及4周組肝組織中IGFBPrP1、CollagenⅠ、FN、TGFβ1、Smad3及p-Smad2/3的表達均較正常對照組顯著增強，且4周組強于2周組(F=20.136、F=6.029、F=17.

8、282、F=7.484、F=20.957、F=87.713，P＜0.01)。肝組織中IGFBPrP1的表達變化與FN(r=0.890，P＜0.01)、CollagenⅠ(r=0.921，P＜0.01)、TGFβ1(r=0.726，P＜0.01)、Smad3(r=0.977，P＜0.01)及p-Smad2/3(r=0.809，P＜0.01)的表達變化呈正相關。
　　 結論：
　　 (1)外源性IGFBPrP1可通過增加細胞