IGFBPrP1siRNA誘導(dǎo)的大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡及其機(jī)制.pdf

1、目的
　　 研究IGFBPrP1siRNA對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡的影響，并探討其可能的機(jī)制。
　　 方法
　　 體外培養(yǎng)大鼠肝星狀細(xì)胞株（HSC-T6），分別設(shè)立：（1）正常對(duì)照組：不加任何轉(zhuǎn)染試劑，不加siRNA；（2）陰性對(duì)照組：加轉(zhuǎn)染試劑和陰性對(duì)照siRNA；（3）IGFBPrP1siRNA轉(zhuǎn)染組：加轉(zhuǎn)染試劑和IGFBPrP1siRNA。
　　 IGFBPrP1siRNA 轉(zhuǎn)染大鼠肝星狀細(xì)胞，轉(zhuǎn)染不同

2、時(shí)間（24h，48h，72h）后，用CCK-8試劑盒檢測(cè)肝星狀細(xì)胞增殖的變化，AnnexinV/PI 雙標(biāo)法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肝星狀細(xì)胞凋亡的變化，免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)肝星狀細(xì)胞中P53、Bcl-2蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果
　　 （1）CCK-8 檢測(cè)結(jié)果顯示：IGFBPrP1siRNA 轉(zhuǎn)染大鼠肝星狀細(xì)胞不同時(shí)間（24h，48h，72h）后，各時(shí)間點(diǎn)IGFBPrP1siRNA 轉(zhuǎn)染組OD值減小，與正常對(duì)照組及陰性對(duì)照

3、組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），各時(shí)間點(diǎn)IGFBPrP1siRNA 轉(zhuǎn)染組細(xì)胞抑制率升高，與正常對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；
　　 （2）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：IGFBPrP1siRNA 轉(zhuǎn)染大鼠肝星狀細(xì)胞不同時(shí)間（24h，48h，72h）后，各時(shí)間點(diǎn)IGFBPrP1siRNA 轉(zhuǎn)染組凋亡率與正常對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），而陰性對(duì)照組與正常對(duì)照組相比，

4、差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；
　　 （3）免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示：IGFBPrP1siRNA 轉(zhuǎn)染大鼠肝星狀細(xì)胞48h后，P53蛋白的表達(dá)：各組均呈P53 陽(yáng)性表達(dá)，即細(xì)胞胞核內(nèi)均可見(jiàn)清晰的棕黃色或棕褐色顆粒沉積，但各組在陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量與著色深淺上有所不同。圖像分析及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：與正常對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染組P53蛋白的表達(dá)量顯著增高（F=84.792，P<0.01）；Bcl-2蛋白的表達(dá)：各組均呈Bcl-2

5、陽(yáng)性表達(dá)，即細(xì)胞胞漿內(nèi)均可見(jiàn)清晰的棕黃色或棕褐色顆粒沉積，但各組在陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量與著色深淺上有所不同。圖像分析及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：與正常對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染組Bcl-2蛋白的表達(dá)量明顯降低（F=235.407，P<0.01）。
　　 結(jié)論
　　 （1）IGFBPrP1siRNA能顯著抑制大鼠肝星狀細(xì)胞的增殖且能促進(jìn)其凋亡；
　　 （2）上調(diào)P53的表達(dá)，下調(diào)Bcl-2的表達(dá)可能是IGFBPrP1siRNA