辛伐他汀對(duì)小鼠脂肪細(xì)胞糖代謝的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、【研究背景】
　　他汀類藥物（3-hydroxy-3-methyl-glut-aryl CoA reeducates inhibitor，HMG CoA還原酶抑制劑）是動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病一級(jí)預(yù)防和二級(jí)預(yù)防的基石。他汀通過(guò)抑制膽固醇合成的限速酶—HMG CoA還原酶—降低患者血漿低密度脂蛋白膽固醇（Low Density Lipoprotein-Cholesterol，LDL-C）濃度，有效延緩和抑制動(dòng)脈粥樣硬化（Athero

2、sclerosis,AS）的發(fā)生發(fā)展，已被確立為調(diào)脂治療及抗動(dòng)脈粥樣硬化治療的首選藥物之一。但近年來(lái)研究顯示，某些他汀類藥物對(duì)糖代謝具有潛在的不利影響，但機(jī)制不清。
　　【目的】
　　觀察親脂性的他汀（辛伐他?。?duì)分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞糖代謝的影響并探討其可能的機(jī)制。
　　【方法】
　　1、采用經(jīng)典的激素“雞尾酒”（誘導(dǎo)培養(yǎng)基A：胰島素5 mg/L，地塞米松1.0μmol/L，3-異丁基-1-甲基-黃嘌呤

3、5 mmol/L；誘導(dǎo)培養(yǎng)基B：胰島素10 mg/L）誘導(dǎo)方法，誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞為成熟的脂肪細(xì)胞，顯微鏡下觀察3T3-L1前脂肪細(xì)胞及脂肪細(xì)胞形態(tài)，油紅“O”染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴聚集。
　　2、將誘導(dǎo)成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞隨機(jī)分為NC組（對(duì)照組）、A組、B組和C組，分別用含0、2、5、10μmol/L辛伐他汀濃度及10 nmol/L胰島素的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)48小時(shí)。
　　3、CCK-8試劑盒分析不同濃度辛伐他汀對(duì)3

4、T3-L1脂肪細(xì)胞活性的影響。
　　4、采用葡萄糖氧化酶法檢測(cè)并計(jì)算各組的葡萄糖消耗量。
　　5、運(yùn)用熒光定量PCR（Real-Time PCR）檢測(cè)IR，GLUT-4及PPAR-γmRNA的表達(dá)水平。
　　6、Western blot檢測(cè)P-PI3K，P-Akt，總GLUT-4及膜GLUT-4蛋白表達(dá)水平。
　　7、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期及細(xì)胞膜上胰島素受體IR、膜蛋白GLUT-4的表達(dá)水平。

5、>　　【結(jié)果】
　　1、顯微鏡下觀察3T3-L1前脂肪細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞樣的長(zhǎng)梭形，胞漿中無(wú)脂滴；分化成熟后，細(xì)胞呈大圓形，胞漿內(nèi)可見(jiàn)大量脂滴包繞胞核，呈“戒環(huán)”狀。
　　2、不同濃度辛伐他?。▽?shí)驗(yàn)濃度：0、2、5、10μmol/L）作用于分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞活性沒(méi)有明顯影響（p>0.05），而當(dāng)濃度過(guò)高時(shí)（辛伐他?。?5、20μmol/L），明顯影響細(xì)胞活性（p<0.05）。
　　3、不同濃度辛伐他汀

6、（實(shí)驗(yàn)濃度：0、2、5、10μmol/L）作用于分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞，葡萄糖消耗量呈濃度依賴性減少，并且在較高濃度時(shí)（辛伐他?。?0、20μmol/L），明顯減少，并且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　4、不同濃度辛伐他?。?、2、5、10μmol/L）作用于分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞，P-Akt表達(dá)水平在高濃度（10μmol/L）時(shí)明顯下降（p<0.05），膜GLUT-4蛋白表達(dá)水平在中高濃度（5、10μmol/

7、L）時(shí)明顯下降（p<0.05），P-PI3K、總GLUT-4蛋白表達(dá)量無(wú)明顯減少（p>0.05）。
　　5、不同濃度辛伐他?。?、2、5、10μmol/L）作用于分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞，IR m RNA水平在中高濃度（5、10μmol/L）時(shí)，表達(dá)明顯減少（p<0.05）；PPAR-γm RNA水平在高濃度（10μmol/L）時(shí)，表達(dá)明顯減少（p<0.05）；GLUT-4 m RNA水平無(wú)明顯變化（p>0.05）。