炎癥對(duì)脂肪細(xì)胞功能的影響及其機(jī)制探討.pdf

1、第一部分，目的：腫瘤壞死因子α(TNF-α)作為促炎因子對(duì)脂肪細(xì)胞功能有多方面的影響，包括促進(jìn)細(xì)胞分化、脂解及脂肪因子分泌等。本文擬研究TNF-α對(duì)傳代培養(yǎng)的兔皮下脂肪細(xì)胞膽固醇流出功能的影響，及可能的作用機(jī)制。 方法 來(lái)源于兔腹股溝皮下的脂肪細(xì)胞以不同濃度的TNF-α(5，10，20ng/ml)干預(yù)24小時(shí)。用液體閃爍計(jì)數(shù)儀測(cè)量脂肪細(xì)胞對(duì)氚標(biāo)膽固醇的流出率。用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)過(guò)氧化物酶體增殖物激

2、活受體γ(PPARγ)、肝X受體α(LXR α)及三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)的mRNA表達(dá)。 結(jié)果 1．5或10 ng/ml TNF-α干預(yù)脂肪細(xì)胞24小時(shí)，可使膽固醇流出率增加，且10 ng/ml TNF-α作用最強(qiáng)(7.03±1.17％)，較對(duì)照組(3.92±0.46％)明顯增高。但20ng/ml TNF-α反而使膽固醇流出率較10 ng/ml時(shí)下降了16.2％(P<0.05)。 2．5或10

3、ng/ml TNF-α可上調(diào)ABCA1表達(dá)，其表達(dá)量分別為0.44±0.17和0.91±0.26，與對(duì)照組0.20±0.06相比差異有顯著性。20 ng/ml TNF-α使ABCA1表達(dá)有所下降(0.69±0.13)。與此同時(shí)，TNF-α可調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞PPARγ和LXR α表達(dá)。在TNF-α≤10 ng/ml時(shí)起促進(jìn)作用，在20 ng/ml時(shí)起抑制作用。 3．預(yù)先以PPARγ特異性抑制劑GW9662孵育半小時(shí)，可抑制10 ng/

4、ml TNF-α對(duì)PPARγ(0.88±0.22 vs 1.37±0.25，P<0.05)和LXR α(0.51±0.14 vs 0.32±0.08，P<0.05)的誘導(dǎo)作用。 結(jié)論：TNF-α影響脂肪細(xì)胞膽固醇流出及其ABCA1表達(dá)，這種作用與TNF-α對(duì)脂肪細(xì)胞PPARγ-LXR α的雙重調(diào)節(jié)作用有關(guān)。 第二部分，目的:脂肪細(xì)胞肥大伴隨一系列功能改變。我們擬研究在氧化低密度脂蛋白(oxLDL)誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞負(fù)荷脂質(zhì)后，

5、TNF-α對(duì)其膽固醇流出和ABCA1表達(dá)的影響是否會(huì)發(fā)生改變。 方法 用50μg/ml oxLDL孵育脂肪細(xì)胞24小時(shí)制造荷脂模型。再以不同濃度TNF-α(5，10，20 ng/ml)干預(yù)24小時(shí)，觀察膽固醇流出變化及用RT-PCR法檢測(cè)脂肪細(xì)胞PPARγ、LXR α和ABCA1 mRNA表達(dá)。 結(jié)果 1．OxLDL可使脂肪細(xì)胞膽固醇流出增加(7.46±2.34％ vs 3.92±0.46％)，PPARγ

6、(1.07±0.26 vs 0.48±0.12)、LXR α(0.83±0.16vS 0.32±0.08)和ABCA1(1.19±0.32 vs 0.20±0.06)表達(dá)上升，P均<0.05。 2．TNF-α抑制荷脂脂肪細(xì)胞膽固醇流出，10 ng/ml時(shí)作用最強(qiáng)(6.02±0.31％vs3.92±0.46％)，在20 ng/ml時(shí)脂肪細(xì)胞膽固醇流出率略有回升(6.12±0.53)，差異有顯著性。 3．從5ng/ml到20

7、ng/ml TNF-α，PPARγ表達(dá)量分別為0.93±0.21，0.77±0.15，0.60±0.16與oxLDL對(duì)照組1.07±0.26相比表達(dá)降低。LXR α表達(dá)量為0.72±0.19，0.61±0.17，0.49±0.09與OXLDL對(duì)照組0.83±0.16相比也有降低。TNF-α呈濃度依賴性抑制脂肪細(xì)胞PPARγ和LXR α表達(dá)。5 ng/ml和10 ng/ml TNF-α分別使脂肪細(xì)胞ABCA1表達(dá)下降了14.4％和34.5

8、％，20ng/ml TNF-α使ABCA1表達(dá)有所回升。 結(jié)論:在oxLDL誘導(dǎo)荷脂的脂肪細(xì)胞中，TNF-α對(duì)PPARγ和LXRα表達(dá)主要表現(xiàn)為抑制作用，并在一定程度上影響到ABCA1表達(dá)及脂肪細(xì)胞膽固醇流出。 第三部分，目的:姜黃素是一類中藥提取物，已證實(shí)其具有抗炎、抗氧化及改善血脂異常等作用。本研究觀察了姜黃素對(duì)脂肪細(xì)胞抗炎脂肪因子脂聯(lián)素表達(dá)和分泌的影響，初步評(píng)價(jià)姜黃素對(duì)脂肪細(xì)胞功能的影響。 方法 新

9、西蘭大白兔腹股溝皮下脂肪細(xì)胞以不同濃度姜黃素(5，10，20μg/ml)孵育24小時(shí)，用ELISA試劑盒檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液脂聯(lián)素水平，并用RT-PCR方法檢測(cè)脂聯(lián)素及其上游因子PPARγ的表達(dá)。 結(jié)果 5.μg/ml至20μg/ml姜黃素分別使兔皮下脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素分泌水平較對(duì)照組(3.13±0.21μmol/l)增加(3.93±0.26，4.49±0.34，5.21±0.39 μmol/l)。脂聯(lián)素mRNA表達(dá)也較對(duì)照組