HSP32基因在熱應(yīng)激小鼠肝組織中的表達(dá)及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、本文研究了不同程度熱應(yīng)激對(duì)小鼠肝臟結(jié)構(gòu)，氧化指標(biāo)及肝功能生化指標(biāo)的影響，探討了不同熱應(yīng)激環(huán)境下小鼠肝臟細(xì)胞凋亡及HSP32基因的表達(dá)情況。并通過(guò)腹腔注射血晶素(hemin)以及錫原卟啉(tin-protoporphyrin，SnPP)分別誘導(dǎo)和抑制HSP32表達(dá)，旨在揭示HSP32對(duì)熱應(yīng)激狀態(tài)下肝組織的保護(hù)作用及HSP32系統(tǒng)的具體作用機(jī)制，為今后研究提供重要線索。
　　1.HSP32與熱應(yīng)激導(dǎo)致的小鼠肝損傷之間相關(guān)性的研究

2、>　　本實(shí)驗(yàn)研究的目的是在長(zhǎng)期慢性熱應(yīng)激下，探討HSP32與熱應(yīng)激導(dǎo)致的小鼠肝損傷之間的相關(guān)性。將48只3周齡小鼠隨機(jī)分成對(duì)照組和熱應(yīng)激組。在熱應(yīng)激1周、3周、6周后分別處死小鼠。稱體重及對(duì)應(yīng)肝臟重量，測(cè)定肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)濃度，檢測(cè)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活力;HE切片觀察肝組織病理學(xué)變化;提取肝組織總RNA，實(shí)時(shí)熒光定量測(cè)定肝組織HSP32mRNA及caspase-3mRN

3、A的表達(dá)，吸光度法檢測(cè)caspase-3活性，ELISA檢測(cè)HSP32蛋白表達(dá)，免疫組化檢測(cè)HSP32蛋白定位。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在熱處理的前3周，血清中AST、ALT水平以及肝組織MDA濃度均明顯升高，SOD活性下降;小鼠肝組織中caspase-3mRNA表達(dá)及活性均顯著增加，同時(shí)組織病理學(xué)觀察結(jié)果也顯示，肝臟在熱處理前3周時(shí)的損傷最為明顯;而在熱處理的第6周，肝組織無(wú)明顯病理學(xué)變化，而且抗氧化指標(biāo)、肝功能生化指標(biāo)及肝細(xì)胞凋亡檢測(cè)指標(biāo)與對(duì)照

4、組無(wú)明顯差異;在整個(gè)熱應(yīng)激階段HSP32 mRNA表達(dá)均顯著高于對(duì)照組，同時(shí)免疫組化結(jié)果也顯示HSP32在所有熱應(yīng)激小鼠肝組織中均有陽(yáng)性表達(dá)。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，肝組織在不同熱應(yīng)激時(shí)間狀態(tài)下所呈現(xiàn)的病理?yè)p傷程度不同，以熱處理3周時(shí)的損傷最為明顯，長(zhǎng)期慢性的熱應(yīng)激會(huì)引起機(jī)體對(duì)抗熱應(yīng)激有害影響的適應(yīng)性改變，從而出現(xiàn)一定程度的恢復(fù);整個(gè)熱應(yīng)激期間，HSP32的表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組，提示其與與熱應(yīng)激導(dǎo)致的小鼠肝損傷之間有明顯的相關(guān)性。
　

5、　2.HSP32基因在熱應(yīng)激小鼠肝組織中的表達(dá)及其作用機(jī)制的研究
　　熱應(yīng)激環(huán)境會(huì)引起動(dòng)物機(jī)體一系列熱休克蛋白的表達(dá)。其中HSP32作為一種熱休克蛋白在許多器官中發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用。由實(shí)驗(yàn)一結(jié)果我們得知HSP32與熱應(yīng)激導(dǎo)致的小鼠肝損傷之間有明顯的相關(guān)性。因此，為確定HSP32對(duì)熱應(yīng)激肝損傷的保護(hù)作用及作用機(jī)制，本次研究擬以熱休克誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷為模型，通過(guò)腹腔注射血晶素(hemin)以及錫原卟啉(tin-protoporphy

6、rin，SnPP)分別誘導(dǎo)和抑制HSP32表達(dá)，并結(jié)合肝功能、氧化應(yīng)激、caspase-3 mRNA及蛋白表達(dá)測(cè)定以及組織病理學(xué)檢測(cè)等技術(shù)，觀察其對(duì)肝損傷的保護(hù)作用，并深入探討HSP32系統(tǒng)的具體作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明急性熱處理導(dǎo)致了小鼠急性肝損傷，并發(fā)生了氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡的現(xiàn)象。小鼠預(yù)先給予hemin能有效誘導(dǎo)肝組織中HSP32mRNA及蛋白大量表達(dá)，和ATH組相比，小鼠肝損傷明顯減輕，而預(yù)先給予SnPP則能有效阻抑小鼠肝組織中HS