熱應(yīng)激預(yù)處理對(duì)熱應(yīng)激小鼠以及體外培養(yǎng)的神經(jīng)元的保護(hù)作用及機(jī)制.pdf

1、目的 高溫環(huán)境對(duì)人體生理功能的影響是廣泛的，包括熱代謝、能量代謝、水鹽代謝、神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等；高溫還能夠誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元發(fā)生凋亡。熱應(yīng)激預(yù)處理可以明顯的提高機(jī)體抗耐熱能力。本實(shí)驗(yàn)通過：1.觀測(cè)不同的熱應(yīng)激預(yù)處理方式對(duì)小鼠行為學(xué)的影響，建立間歇性熱應(yīng)激預(yù)處理模型。2.觀測(cè)熱應(yīng)激預(yù)處理對(duì)小鼠行為學(xué)的影響，揭示熱應(yīng)激預(yù)處理對(duì)小鼠腦體功能的影響。3.檢測(cè)熱應(yīng)激預(yù)處理對(duì)急性熱應(yīng)激小鼠腦組織NOS活力、nNOS蛋白和基因表達(dá)以

2、及行為學(xué)的影響。觀測(cè)熱應(yīng)激預(yù)處理對(duì)體外培養(yǎng)的神經(jīng)元細(xì)胞熱應(yīng)激后的細(xì)胞形態(tài)、突出長(zhǎng)度以及細(xì)胞活性的影響，揭示熱應(yīng)激預(yù)處理拮抗急性熱應(yīng)激的機(jī)制。 方法 1.成年健康昆明系雄性小鼠(體重20±2.0g)隨機(jī)分為3組：正常對(duì)照組，間歇性20min熱應(yīng)激預(yù)處理組，間歇性30min熱應(yīng)激預(yù)處理組，每組30只。建立小鼠間歇性20min以及30min熱應(yīng)激預(yù)處理模型，預(yù)處理結(jié)束后0、6、12、24、36h分別取6只動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。采用穿梭和斜板

3、實(shí)驗(yàn)測(cè)試小鼠學(xué)習(xí)記憶功能。2.成年健康昆明系雄性小鼠(體重20±2.0g)隨機(jī)分為3組：正常對(duì)照組，間歇性熱應(yīng)激預(yù)處理組，連續(xù)性熱應(yīng)激預(yù)處理組，每組30只。復(fù)制小鼠間歇性和連續(xù)性熱應(yīng)激預(yù)處理模型，預(yù)處理結(jié)束后0、6、12、24、36h分別取6只動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。采用穿梭和斜板實(shí)驗(yàn)測(cè)試小鼠學(xué)習(xí)記憶功能。3.成年健康昆明系雄性小鼠(體重20±2.0g)隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照組，熱應(yīng)激組，間歇性熱應(yīng)激預(yù)處理組，連續(xù)性熱應(yīng)激預(yù)處理組，每組30只。復(fù)

4、制小鼠間歇性和連續(xù)性熱應(yīng)激預(yù)處理模型以及急性熱應(yīng)激模型，熱應(yīng)激結(jié)束后0、6、12、24、36h每組分別取6只動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。采用穿梭和斜板實(shí)驗(yàn)測(cè)試小鼠學(xué)習(xí)記憶功能。并且在熱應(yīng)激結(jié)束后6h、12h、24h用NADPH-d組織化學(xué)、ABC免疫組化、RT-PCR測(cè)定小鼠腦組織NOS的活性、nNOS的蛋白和基因表達(dá)。4.建立大鼠大腦皮層神經(jīng)元原代培養(yǎng)技術(shù)，在培養(yǎng)6天后觀察熱應(yīng)激預(yù)處理對(duì)熱應(yīng)激后細(xì)胞生長(zhǎng)情況、生長(zhǎng)活力及突起長(zhǎng)度的影響。 結(jié)果

5、 1、間歇性熱應(yīng)激預(yù)處理模型的建立與對(duì)照組比較，間歇性20min、30min預(yù)處理組小鼠腦體功能均受到一定程度損傷。間歇性20min預(yù)處理組恢復(fù)更快，而且在處理24h時(shí)腦體功能明顯優(yōu)于間歇性30min熱應(yīng)激預(yù)處理組(P＜0.05)。 2、行為學(xué)結(jié)果在穿梭實(shí)驗(yàn)中，學(xué)習(xí)記憶成績(jī)結(jié)果顯示：1.與對(duì)照組相比，兩個(gè)預(yù)處理組在0h，6h時(shí)成績(jī)明顯較差(P＜0.05)。間歇性預(yù)處理組小鼠在24h時(shí)較對(duì)照組，成績(jī)明顯較好(P＜0.05)。2.

6、與對(duì)照組相比，熱應(yīng)激組在0h、6h、12h；兩個(gè)預(yù)處理組在0h、6h時(shí)成績(jī)明顯較差(P＜0.05)。與熱應(yīng)激組相比，兩個(gè)預(yù)處理組在12h時(shí)成績(jī)明顯較好(P＜0.05)。 在斜板實(shí)驗(yàn)中，體力成績(jī)顯示：1.與對(duì)照組相比，兩個(gè)預(yù)處理組在0h、6h時(shí)，爬坡角度明顯降低(P＜0.05)。間歇性預(yù)處理組24h時(shí)較對(duì)照組以及連續(xù)性預(yù)處理組，斜板角度明顯增高(P＜0.05)。2.與對(duì)照組相比，熱應(yīng)激組在0h、6h、12h時(shí)爬坡角度明顯降低(P＜

7、0.05)；兩個(gè)預(yù)處理組在0h、6h時(shí)爬坡角度明顯降低(P＜0.05)。與熱應(yīng)激組相比，間歇性預(yù)處理組在6h、12h時(shí)，連續(xù)性預(yù)處理組在12h時(shí)爬坡角度明顯增高(P＜0.05)。 3、NADPH-d組織化學(xué)和nNOS免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與正常對(duì)照組相比，熱應(yīng)激組以及兩個(gè)預(yù)處理組在6h小鼠皮層和海馬CA1區(qū)NADPH-d、nNOS陽性神經(jīng)元數(shù)量明顯增多，差異有顯著性(P＜0.05)；熱應(yīng)激組在12h時(shí)小鼠皮層及海馬CA1區(qū)NADP

8、H-d、nNOS陽性神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，差異有顯著性(P＜0.05)。與熱應(yīng)激組比較，兩個(gè)預(yù)處理組小鼠皮層和海馬CA1區(qū)NADPH-d、nNOS陽性神經(jīng)元數(shù)量在6h、24h明顯較少，差異有顯著性(P＜0.05)，在12h時(shí)NADPH-d、nNOS陽性神經(jīng)元數(shù)量明顯較多，差異有顯著性(P＜0.05)。兩個(gè)預(yù)處理組間NADPH-d、nNOS陽性神經(jīng)元數(shù)量無明顯較差別，差異無顯著性(P＞0.05)。 4、RT-PCR結(jié)果熱應(yīng)激組在6h

9、時(shí)電泳條帶最亮，光密度值最高，熱應(yīng)激組在12h時(shí)電泳條帶相對(duì)最暗，吸光度值最低。與對(duì)照組相比，熱應(yīng)激組以及兩個(gè)預(yù)處理組在6h時(shí)，其nNOSmRNA表達(dá)的相對(duì)含量明顯增多，差異有顯著性(P＜0.05)；熱應(yīng)激組在12h時(shí)nNOSmRNA表達(dá)的相對(duì)含量明顯減少，差異有顯著性(P＜0.05)；與熱應(yīng)激組相比，兩個(gè)預(yù)處理組在6h、24h時(shí)nNOSmRNA表達(dá)的相對(duì)含量明顯減少，差異有顯著性(P＜0.05)；兩個(gè)預(yù)處理組在12h時(shí)nNOSmRNA

10、表達(dá)的相對(duì)含量明顯較多，差異有顯著性(P＜0.05)。 5.細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果熱應(yīng)激可以明顯地抑制神經(jīng)元細(xì)胞的生長(zhǎng)，與對(duì)照組比較其神經(jīng)細(xì)胞突起長(zhǎng)度均明顯較短(P＜0.05)；神經(jīng)細(xì)胞活力明顯下降(P＜0.05)。與對(duì)照組相比，兩個(gè)預(yù)處理組在0h、6h時(shí)細(xì)胞突起長(zhǎng)度明顯較短(P＜0.05)，在0h、6h時(shí)神經(jīng)細(xì)胞活力明顯下降(P＜0.05)。與HS組相比兩個(gè)預(yù)處理組在6h、12h細(xì)胞突起長(zhǎng)度明顯較短(P＜0.05)；細(xì)胞活力明顯較高(P