GDNF在慢性應(yīng)激所致神經(jīng)元損傷中的作用.pdf

1、采用多因素慢性不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激方法建立動(dòng)物模型（應(yīng)激源：足底電擊、冰水游泳、高臺(tái)、斜籠、禁食、禁水、通宵照明，21天），探究慢性應(yīng)激小鼠行為學(xué)的改變以及腦區(qū)海馬和前腦皮層神經(jīng)元膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（GDNF）表達(dá)的變化。并給予動(dòng)物不同劑量中藥復(fù)方枳菊解郁湯和單味藥郁金和石菖蒲，通過(guò)開(kāi)場(chǎng)、懸尾觀測(cè)各組小鼠的情緒改變、自覺(jué)活動(dòng)和探索能力的改變；Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)觀測(cè)小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力的改變；HE染色觀察小鼠海馬和前腦皮層神經(jīng)元形態(tài)

2、學(xué)變化；免疫組化測(cè)定GDNF在小鼠海馬和前腦皮層的表達(dá)情況，探討慢性應(yīng)激和抑郁癥之間的關(guān)系以及枳菊解郁湯的抗抑郁作用機(jī)制。
　　研究結(jié)果：
　　1.應(yīng)激組小鼠應(yīng)激后即刻的水平活動(dòng)次數(shù)、垂直活動(dòng)次數(shù)、修飾次數(shù)均較對(duì)照組明顯降低，中央格停留時(shí)間明顯延長(zhǎng)，糞便粒數(shù)顯著增多；應(yīng)激結(jié)束后12 h和24 h應(yīng)激組小鼠的水平活動(dòng)次數(shù)、垂直活動(dòng)次數(shù)與修飾次數(shù)減少，糞便粒數(shù)增加，但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而中央格停留時(shí)間顯著增加；應(yīng)激結(jié)束后一周

3、，應(yīng)激組小鼠的糞便粒數(shù)與中央格停留時(shí)間明顯增多，水平活動(dòng)次數(shù)與垂直活動(dòng)次數(shù)均明顯降低。
　　2.在應(yīng)激后即刻，對(duì)照組小鼠和應(yīng)激組小鼠在定位航行試驗(yàn)中的逃避潛伏期均顯著降低；應(yīng)激結(jié)束后12h、24h和應(yīng)激結(jié)束后一周，對(duì)照組小鼠的逃避潛伏期明顯降低，而應(yīng)激組小鼠的逃避潛伏期雖有下降趨向，但差異不顯著。與對(duì)照組小鼠相比，在應(yīng)激后即刻，應(yīng)激組小鼠空間搜索試驗(yàn)中原平臺(tái)象限的停留時(shí)間明顯減少；應(yīng)激結(jié)束后12h和24 h，應(yīng)激組小鼠在原平臺(tái)象限

4、的停留時(shí)間雖有所降低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；應(yīng)激結(jié)束后一周，應(yīng)激組小鼠在原平臺(tái)象限停留的時(shí)間明顯縮短。
　　3.與對(duì)照組小鼠相比，應(yīng)激組小鼠海馬及前腦皮層神經(jīng)元數(shù)目減少，排列稀疏且比較散亂，細(xì)胞染色不均勻。在應(yīng)激后即刻，應(yīng)激組小鼠海馬和前腦皮層GDNF的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目和對(duì)照組小鼠相比較明顯減少，灰度值明顯增大；應(yīng)激結(jié)束后12h和24h，應(yīng)激組小鼠GDNF陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少，平均目標(biāo)灰度值增多，但均沒(méi)有顯著差異。應(yīng)激結(jié)束后一周應(yīng)激組小鼠腦區(qū)的G

5、DNF陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少，平均目標(biāo)灰度值增加。
　　4.①在開(kāi)場(chǎng)行為測(cè)試中，模型組小鼠開(kāi)場(chǎng)行為各指標(biāo)均較對(duì)照組相比有顯著性差異；氟西汀組和中藥中劑量小鼠開(kāi)場(chǎng)行為各指標(biāo)與模型組相比差異均有顯著性，高劑量組水平活動(dòng)次數(shù)、垂直活動(dòng)次數(shù)及中央格停留時(shí)間均有明顯差異：而低劑量組、郁金、石菖蒲組小鼠無(wú)明顯差異。②在懸尾試驗(yàn)中，模型組小鼠在懸尾實(shí)驗(yàn)中的第一次靜止不動(dòng)時(shí)間和后4min累積不動(dòng)時(shí)間較對(duì)照組相比均明顯增加。氟西汀組和復(fù)方中藥中劑量組小

6、鼠與模型組小鼠比較兩次不動(dòng)時(shí)間均顯著減少；低劑量和高劑量組小鼠僅第一次靜止不動(dòng)時(shí)間顯著減少；郁金組和石菖蒲組無(wú)顯著性差異。③在水迷宮實(shí)驗(yàn)中，模型組小鼠的總路程和逃避潛伏期與對(duì)照組相比均明顯延長(zhǎng)；原平臺(tái)象限停留時(shí)間顯著縮短。和模型組小鼠相比，氟西汀組和中藥中劑量組小鼠的總路程和逃避潛伏期具有顯著性差異；高劑量組的逃避潛伏期只是最后一天明顯縮短，低劑量組、郁金和石菖蒲組小鼠的總路程和逃避潛伏期無(wú)顯著性差異。與模型組相比，氟西汀組、中藥低、中

7、、高劑量組小鼠在原平臺(tái)象限停留的時(shí)間明顯延長(zhǎng)，郁金組與石菖蒲組小鼠在原平臺(tái)象限停留的時(shí)間雖然延長(zhǎng)但無(wú)顯著性差異。對(duì)照組小鼠經(jīng)過(guò)平臺(tái)的次數(shù)明顯多于模型組。與模型組小鼠相比，氟西汀組以及各藥物組經(jīng)過(guò)平臺(tái)的次數(shù)增多，且氟西汀組和中藥中、高劑量組小鼠具有顯著性差異。
　　5.對(duì)照組、氟西汀組、中藥中劑量組和高劑量組小鼠的海馬各區(qū)細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，數(shù)目多，邊界清晰，核位居胞體的中央，染色深；前腦皮層的神經(jīng)元形態(tài)完整，層次緊密，染色

8、均勻。低劑量組、郁金組與石菖蒲組小鼠海馬和前腦細(xì)胞排列比較稀疏、松散，數(shù)量少，細(xì)胞間隙大，且染色較淺。模型組小鼠海馬與前腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞變形，有的出現(xiàn)萎縮，細(xì)胞數(shù)目明顯減少，細(xì)胞間隙大，形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞染色淺，著色不均勻。
　　6.模型組小鼠腦內(nèi)海馬各區(qū)和前腦皮層的GDNF陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目較對(duì)照組小鼠相比明顯降低，灰度值明顯增大；和模型組小鼠相比，各中藥組和氟西汀組小鼠海馬和前腦皮層GDNF陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均有所增加，灰度值下降，以中藥中劑

9、量差異最為顯著，而中藥低劑量組、郁金組和石菖蒲組小鼠無(wú)顯著性差異。
　　研究結(jié)論：
　　1.慢性應(yīng)激可引起小鼠在新異環(huán)境下的自發(fā)活動(dòng)和探究能力明顯減弱，小鼠空間學(xué)習(xí)與記憶能力明顯受損。
　　2.慢性應(yīng)激后可致小鼠海馬和前腦皮層神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生明顯的形態(tài)學(xué)變化，海馬和前腦皮層GDNF表達(dá)明顯下降。
　　3.枳菊解郁湯可明顯改善慢性應(yīng)激抑郁模型小鼠行為學(xué)的變化，明顯增強(qiáng)小鼠空間學(xué)習(xí)與記憶能力，表現(xiàn)出一定的抗抑郁效應(yīng)。