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文檔簡介
1、目的:小膠質(zhì)細(xì)胞的激活和炎癥因子的異常表達(dá)是帕金森病(Parkinson’sDisease,PD) 重要而易被忽略的病理特征。抑制上述兩種反應(yīng)對PD的治療有著重要的意義。法安明(Fragmin)為一種低分子肝素(Low molecular weightheparin,LMWH),是臨床常用的抗凝血藥物。研究發(fā)現(xiàn)LMWH 除了抗凝作用外還有強(qiáng)大的抗炎作用且與發(fā)揮抗凝作用的官能團(tuán)不同。本實驗通過研究1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡
2、啶(1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)所致帕金森病小鼠模型中腦黑質(zhì)區(qū)的小膠質(zhì)細(xì)胞的激活情況及腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)的表達(dá),以及使用法安明后小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)的比較和TNF-α表達(dá)的變化,探討法安明減少DA能神經(jīng)元的損傷是否與抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化和TNF-α上調(diào)有關(guān),為臨床治療帕金森病提供新實驗依據(jù)。
方
3、法:
1、25只C57BL/6 小鼠隨機(jī)分成MPTP組10只(1 組),LMWH+MPTP組(2組)10只,正常對照組5只(3組)。
2、建立PD 動物模型及治療方法:1組腹部皮下注射生理鹽水8d共16次,2d后開始皮下注射MPTP30 mg/kg,連續(xù)6d,LMWH+MPTP組在注射MPTP 前2d 開始腹部皮下注射法安明200IU/kg·12h,連續(xù)8d。對照組以同樣的方式在相應(yīng)時間點注射相應(yīng)劑量的生理鹽
4、水。
3、癥狀觀察及行為學(xué)測試:觀察注射MPTP 后各組小鼠出現(xiàn)震顫的情況。以爬竿試驗,游泳試驗及懸掛試驗評價末次注射MPTP 后各組小鼠行為學(xué)變化。
4、小膠質(zhì)細(xì)胞鍍銀染色法顯示各組小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)變化,觀察其活化的情況。
5、免疫組化觀察各組小鼠酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase,TH)陽性細(xì)胞數(shù)和TNF-α陽性細(xì)胞數(shù)量變化。
6、統(tǒng)計數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差
5、()表示,3組間予單因素方差分析,SNK 法兩兩檢驗,以P<0.05為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。
結(jié)果:
1、LMWH+MPTP 組及對照組小鼠行為無明顯改變,MPTP 組小鼠動作遲緩,對外界刺激反應(yīng)降低。
2、爬竿試驗MPTP 組小鼠較LMWH+MPTP、對照組時間明顯延長(P<0.05),懸掛試驗及游泳試驗評分明顯下降(P<0.05)。
3、鍍銀染色顯示MPTP 組小鼠活化的小膠質(zhì)細(xì)胞較
6、LMWH+MPTP 組及對照組明顯增加(P<0.05)。
4、TH 免疫組化結(jié)果顯示MPTP 組TH 陽性細(xì)胞較LMWH+MPTP 組及對照組小鼠明顯減少(P<0.05)。
5、TNF-α免疫組化顯示MPTP 組小鼠的黑質(zhì)區(qū)TNF-α陽性細(xì)胞較LMWH+MPTP、對照組明顯增加(P<0.05)。
結(jié)論:
1、利用注射MPTP的方法建立了帕金森病小鼠模型。
2、法安明能
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