Purmorphamine對(duì)帕金森病中多巴胺能神經(jīng)元的保護(hù)及作用機(jī)制.pdf

1、帕金森病(PD)是神經(jīng)系統(tǒng)疾病中常見(jiàn)的由遺傳和環(huán)境因素為基礎(chǔ)神經(jīng)退行性疾病。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用脂多糖（LPS）誘導(dǎo)小鼠小膠質(zhì)瘤細(xì)胞（BV2）建立小膠質(zhì)細(xì)胞炎性激活模型，運(yùn)用腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤克隆的細(xì)胞株P(guān)C12細(xì)胞的生理生化特征模擬多巴胺能神經(jīng)元。觀察在SHH信號(hào)通路激活劑2,6,9-三取代嘌呤化合物（PM）激活SHH信號(hào)通路的情況下，對(duì)LPS作用下BV2細(xì)胞炎癥因子、腫瘤壞死因子受體作用因子3（TRAF3）的表達(dá)以及PC12細(xì)胞存活率的影響。最

2、后觀察PM對(duì)1-甲基-4-苯基-1、2、3、6-四氫吡啶(MPTP)制作的小鼠帕金森病模型中小鼠行為學(xué)、多巴胺（DA）能神經(jīng)元、小膠質(zhì)細(xì)胞的影響。為臨床治療帕金森病提供新的理論依據(jù)。
　　第一部分 PM對(duì)帕金森病炎癥細(xì)胞模型的影響及作用機(jī)制
　　目的：為探討SHH信號(hào)通路激活劑，2,6,9-三取代嘌呤化合物(PM)對(duì)帕金森病炎癥細(xì)胞模型中炎癥因子TNF-α，IL-1β和Peli1 mRNA的表達(dá)，以及對(duì)PC12細(xì)胞的影響及其

3、作用機(jī)制。
　　方法：應(yīng)用MTT法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Q-PCR)技術(shù)分別檢測(cè)了細(xì)胞活性和相關(guān)基因的表達(dá)。
　　結(jié)果:1) MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示：與對(duì)照組細(xì)胞相比，脂多糖(LPS)組、PM組和二甲基亞砜(DMSO)組BV2細(xì)胞的存活率無(wú)明顯差異；而與LPS組相比，PM+LPS組PC12細(xì)胞的存活率顯著升高。2）Q-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：①與對(duì)照組相比，LPS-24 h組TNF-α、IL-1β、Peli1mRNA的表達(dá)顯著升高

4、，LPS-4 h組Smo和Gli1mRNA的表達(dá)顯著升高，而LPS-24 h組TRAF3mRNA表達(dá)顯著下降；②與對(duì)照組相比，PM-24 h組的Smo、Gli1mRNA表達(dá)顯著升高；③與LPS組相比，PM+LPS組BV2細(xì)胞TRAF3 mRNA的表達(dá)顯著升高，而炎癥因子TNF-α，IL-1β，Peli1mRNA的表達(dá)顯著下降。
　　結(jié)論：1）LPS能誘導(dǎo)BV2細(xì)胞建立小膠質(zhì)細(xì)胞激活的炎癥細(xì)胞模型；2）炎癥狀態(tài)下的BV2細(xì)胞中存在S

5、HH信號(hào)通路的激活；3）PM能夠激活SHH信號(hào)通路降低炎癥因子的表達(dá)、保護(hù)PC12細(xì)胞，其作用機(jī)制可能與提高TRAF3 mRNA的表達(dá)有關(guān)。
　　第二部分 PM對(duì)小鼠行為學(xué)、多巴胺能神經(jīng)元及小膠質(zhì)細(xì)胞的影響
　　目的：探討PM激活SHH信號(hào)通路對(duì)MPTP作用下，帕金森病動(dòng)物模型中DA能神經(jīng)元及小膠質(zhì)細(xì)胞的影響。
　　方法：采用MPTP制作小鼠PD模型，PM預(yù)處理小鼠，使用懸桿實(shí)驗(yàn)、免疫組織化學(xué)、Q-PCR檢測(cè)PM對(duì)小鼠

6、行為學(xué)、DA能神經(jīng)元、小膠質(zhì)細(xì)胞及相關(guān)炎癥因子表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：1）懸桿實(shí)驗(yàn)顯示：在預(yù)處理PM24h后MPTP誘導(dǎo)的小鼠帕金森病模型中，與MPTP組相比，PM+MPTP組小鼠后爪抓到橫桿的時(shí)間明顯縮短；而與control組相比，MPTP組中小鼠后爪抓到橫桿的時(shí)間顯著延長(zhǎng)。2） TH免疫組織化學(xué)顯示：control組TH+DA能神經(jīng)元染色很深，胞體密集，突起明顯；與control組相比，MPTP組TH+DA能神經(jīng)元數(shù)量明顯減少

7、，細(xì)胞質(zhì)著色變淺，突起變短或者消失；與MPTP組相比，PM+MPTP組TH+DA能神經(jīng)元不僅損失細(xì)胞的數(shù)目明顯減少，而且細(xì)胞質(zhì)染色變深，突起增多。3）Iba1免疫組織化學(xué)染色顯示：與control相比，MPTP組小膠質(zhì)細(xì)胞變大染色深、形態(tài)不規(guī)則、突起變粗；與MPTP組相比，PM+MPTP組小膠質(zhì)細(xì)胞胞體形態(tài)較小，染色較淺，突起呈現(xiàn)細(xì)長(zhǎng)較多。4) Q-PCR檢測(cè)顯示：與control組相比，MPTP組炎癥因子TNF-α和Iba1 mRNA