利用原位雜交技術(shù)研究H1N1流感病毒對(duì)心臟發(fā)育基因的影響.pdf

1、先天性心臟病是一類嚴(yán)重威脅人類健康的疾病，遺傳因素和環(huán)境因素是導(dǎo)致先天性心臟病的主要原因。在過(guò)去的幾十年里，人們對(duì)導(dǎo)致先天性心臟病的研究取得了極大的進(jìn)展，但對(duì)先天性心臟病的致病機(jī)制還是了解不多，尤其是環(huán)境因子影響心臟發(fā)育更是知之甚少。已有研究證明懷孕早期宮內(nèi)病毒感染是最重要的環(huán)境因子之一。而臨床流行病學(xué)調(diào)研表明有15種病毒的早期宮內(nèi)感染可能與先天性心臟病的發(fā)生有關(guān)，但尚未有實(shí)驗(yàn)證明兩者之間的關(guān)系。因此研究流感病毒對(duì)心臟發(fā)育相關(guān)基因的影響

2、具有重要的意義。
　　本課題以SPF級(jí)純種KM小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，通過(guò)建立穩(wěn)定感染的H1N1流感病毒小鼠模型，以形態(tài)觀察和原位雜交為主要手段，并以BMP信號(hào)途徑為研究對(duì)象，從基因表達(dá)水平驗(yàn)證分析了BMP信號(hào)途徑成員及部分心臟標(biāo)志基因的表達(dá)變化。本論文獲得主要研究結(jié)果如下:
　　1、根據(jù)小鼠胚胎心臟的發(fā)育時(shí)間，在懷孕第7.5天進(jìn)行攻毒，構(gòu)建了H1N1流感病毒感染小鼠模型。對(duì)病毒感染懷孕小鼠胚胎及其對(duì)照進(jìn)行了形態(tài)學(xué)觀察研究，發(fā)現(xiàn)病毒

3、感染組胚胎發(fā)育延緩，心臟發(fā)育異常。
　　2、原位雜交檢測(cè)BMP信號(hào)通路相關(guān)基因，發(fā)現(xiàn)在病毒感染胚胎中BMP4/5/7和BAMBI在早期心臟中表達(dá)都下調(diào)，說(shuō)明了流感病毒影響了BMP信號(hào)通路。
　　3、原位雜交檢測(cè)心臟發(fā)育核心調(diào)控因子Nkx2.5在胚胎9.5、10.5天的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)病毒感染胚胎在這兩個(gè)時(shí)期表達(dá)明顯減少，說(shuō)明流感病毒影響了心臟發(fā)育。
　　4、原位雜交檢測(cè)第二心域標(biāo)志因子Isl1和Fgf10的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)Isl1

4、在10.5和11.5天的病毒感染胚胎的右心室和流出道表達(dá)減少，F(xiàn)gf10亦在10.5天的病毒感染胚胎的右心室和流出道下調(diào)，說(shuō)明流感病毒能影響第二心域發(fā)育。
　　5、進(jìn)一步對(duì)腔室特化因子MLC2a和ehand的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)MCL2a在9.5天的病毒感染胚胎表達(dá)減少，ehand在10.5、11.5天的病毒感染胚胎的左心室區(qū)域顯著下調(diào)，這表明流感病毒也影響了心臟的腔室建成。
　　綜上所述，這些結(jié)果初步表明在早期心臟發(fā)育中流感