正元膠囊防治癌因性疲乏的療效及機(jī)制研究.pdf

1、目的:通過(guò)臨床資料分析及建立癌因性疲乏(CRF)肺癌裸小鼠模型，評(píng)價(jià)正元膠囊防治由腫瘤本身及化療所引起的CRF的療效，并明確中藥復(fù)方正元膠囊緩解CRF的作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.臨床研究部分:使用Piper疲乏修訂量表、自制中醫(yī)辨證表，對(duì)191例CRF患者的疲乏程度與中醫(yī)證型進(jìn)行分析，結(jié)合該科既往研究結(jié)果，探討正元膠囊防治癌因性疲乏的中醫(yī)理論依據(jù)。
　　2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分:建立A549肺腺癌移植瘤裸小鼠模型。180

2、只裸小鼠，隨機(jī)抽取20作為正常對(duì)照(NC)組，不接種A549細(xì)胞，其余為接種A549細(xì)胞。接種完后，當(dāng)瘤塊長(zhǎng)到50mm3-100mm3（接種后第7天）的時(shí)候，隨機(jī)分為8組，每組20只。全部小鼠分為9組，即正常對(duì)照(NC)組、癌模型(TC)組、正元膠囊低劑量(ZD)組、正元膠囊中劑量(ZZ)組、正元膠囊高劑量(ZG)組，順鉑(P)組，正元膠囊低劑量+順鉑(LD)組、正元膠囊中劑量+順鉑(LZ)組、正元膠囊高劑量+順鉑(LG)組。中藥(Z)

3、組包括三個(gè)劑量亞組（ZD、ZZ、ZG組），聯(lián)合(L)組包括三個(gè)劑量亞組（LD、LZ、LG組）。參考藥物等效劑量公式，設(shè)定正元膠囊低劑量組給藥劑量為0.45g/kg，中劑量組為0.9g/kg，高劑量組為1.8g/kg，灌胃，每天1次。順鉑的給藥劑量為5 mg/kg，腹腔注射，每3天一次。分組后（A549細(xì)胞接種第7天）開(kāi)始給藥，每天一次，連續(xù)21天。正常對(duì)照組和癌模型組給予相應(yīng)體積的生理鹽水灌胃。
　　通過(guò)觀察并記錄實(shí)驗(yàn)過(guò)程中小鼠的

4、一般情況、體重、瘤體體積，并進(jìn)行力竭游泳實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)肝糖原含量，評(píng)價(jià)正元膠囊防治癌因性疲乏的療效;運(yùn)用流式細(xì)胞技術(shù)、瑞姬氏染色、ELISA、細(xì)胞因子抗體芯片技術(shù)，檢測(cè)外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)、骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)、骨髓細(xì)胞涂片、細(xì)胞因子、皮質(zhì)酮、T3、T4等，初步闡明正元膠囊防治CRF的作用機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.臨床研究表明，脾氣虛出現(xiàn)率最高，占80.6％，其次為腎氣虛，占43.5％;有脾陽(yáng)虛、肝氣郁結(jié)的患者疲勞程

5、度偏重，疲乏得分偏高;有腎陽(yáng)虛、腎氣虛的患者疲勞程度偏重，疲乏得分偏高。
　　2.正元膠囊對(duì)CRF小鼠的藥效學(xué)研究
　　(1)正元膠囊對(duì)荷瘤小鼠一般情況的影響。干預(yù)前，各組小鼠一般情況，包括體重均衡。干預(yù)3周后，小鼠一般情況從相對(duì)較好到差依次為NC組、ZD組、ZZ組、ZG組、TC組、LZ組、LD組、LG組、P組。荷瘤小鼠體重，NC組＞TC組（P=0.023），L組＞P組（P=0.024），表明正元膠囊能緩解化療所致的CRF小

6、鼠體重減輕。
　　(2)正元膠囊對(duì)荷瘤小鼠軀體性疲勞的影響。不同組小鼠在干預(yù)前力竭游泳時(shí)間均衡，干預(yù)18天時(shí)，TC組較NC組力竭游泳時(shí)間縮短;Z組各劑量亞組時(shí)間均較TC組延長(zhǎng);L組各劑量亞組時(shí)間均較P組明顯延長(zhǎng);L組各劑量亞組時(shí)間較TC組延長(zhǎng);LG組較LD組、較LZ組（P=0.017）游泳時(shí)間均延長(zhǎng)。正元膠囊能延長(zhǎng)腫瘤及化療引起的CRF小鼠力竭游泳時(shí)間縮短，緩解軀體性疲勞;聯(lián)合化療時(shí)，高劑量組游泳時(shí)間最長(zhǎng)，即高劑量正元膠囊緩解順鉑

7、化療引起的軀體性疲勞效果更佳。
　　肝糖原的檢測(cè)結(jié)果表明，TC組與NC組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，Z組肝糖原較TC組上升，L組較P組上升，L組較TC組上升。正元膠囊能增加未化療及接受化療的CRF小鼠的肝糖原儲(chǔ)備，有助于緩解疲勞。
　　(3)正元膠囊對(duì)荷瘤小鼠精神性疲勞的影響。懸尾實(shí)驗(yàn)表明，TC組不動(dòng)時(shí)間較NC組延長(zhǎng)。Z組較TC組顯著縮短，L組較P組顯著縮短。正元膠囊能縮短腫瘤及化療所致的懸尾不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)。
　　曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)表明，NC

8、組總運(yùn)動(dòng)距離（P=0.040）、外周格運(yùn)動(dòng)距離（P=0.039）、平均速度（P=0.040）均高于TC組，中央格運(yùn)動(dòng)距離（P=0.046）低于TC組，休息時(shí)（P=0.351）、大便粒數(shù)（P=0.228）兩組間無(wú)差別。Z組中央格運(yùn)動(dòng)距離較TC組明顯縮短。L組總運(yùn)動(dòng)距離（P=0.018）、外周格運(yùn)動(dòng)距離（P=0.002）、平均速度較P組上升，中央格運(yùn)動(dòng)距離較P組顯著下降。休息時(shí)間在各組荷瘤小鼠間并未發(fā)現(xiàn)有明顯差異。大便粒數(shù)，Z組最多，P組最

9、少。正元膠囊能改善CRF小鼠的曠場(chǎng)運(yùn)動(dòng)情況。
　　(4)正元膠囊對(duì)荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用。P組(P=0.001)、L組（P＜0.001)、Z組（P=0.030）的瘤重較TC組均有減輕，Z組、L組、P組的抑瘤率分別為26.9％、60.0％、57.1％。干預(yù)19d時(shí)，P組瘤體體積小于TC組（P=0.019）、L組瘤體體積小于TC組。正元膠囊能在一定程度上抑制腫瘤生長(zhǎng)，與化療藥物順鉑配合，能進(jìn)一步縮小腫瘤，提高抑瘤率。
　　3

10、.正元膠囊對(duì)CRF小鼠造血及免疫功能的影響。外周血WBC計(jì)數(shù)、HGB含量，骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)，均表現(xiàn)為L(zhǎng)組＞P組（P＜0.001）;未發(fā)現(xiàn)正元膠囊對(duì)RBC、PLT計(jì)數(shù)有影響。血清中細(xì)胞因子含量: EPO水平，Z組＞TC組(P=0.049)，L組＞P組（P=0.038）。G-CSF水平，L組＞P組（P=0.043）。IL-3水平，LD組＞P組（P=0.001），Z組各亞組較TC組上升（P＜0.05），ZD組＞ZG組（P=0.003），LD組

11、＞LZ組（P＜0.001)。TNF-α水平，ZG組較TC組下降（P=0.004），LZ組（P=0.013）、LG組（P=0.010）較P組下降，ZG組較ZD組（P=0.05）、ZZ組均有下降（P=0.024），LZ組（P=0.026）、LG組（P=0.021）均較LD下降。IL-6水平，ZZ組、ZG組均較TC下降（P＜0.001），LD組、LZ組、LG組均較P組下降（P＜0.001），ZZ組、ZG組較ZD組均有下降（P＜0.001），L

12、Z組較LD組（P＜0.001）、LG組（P=0.017）均有下降。IL-2水平，Z組各劑量亞組IL-2水平較TC組均上升（P＜0.05），且隨著中藥劑量上升，IL-2的上升幅度增大;LZ組和LG組IL-2水平均高于P組(P＜0.001)，且中藥劑量越高，IL-2的上升幅度越大。
　　以上結(jié)果表明正元膠囊能提高腫瘤及化療所致CRF小鼠血清EPO水平下降;提高化療所致的外周血白細(xì)胞、血色素下降，骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)減少，血清G-CSF水平

13、降低;提高血清IL-3水平，且低劑量組效果更佳;降低血清TNF-α水平，但最佳劑量未能確定;降低血清IL-6水平，且中劑量組效果更佳;還能提高血清IL-2水平，且IL-2水平隨著中藥劑量的上升而上升。未發(fā)現(xiàn)正元膠囊對(duì)血清IL-1β水平有影響。此外，正元膠囊能增加化療后CRF小鼠的脾臟指數(shù)，表現(xiàn)為L(zhǎng)組脾臟指數(shù)較P組上升(P=0.013)。
　　4.正元膠囊對(duì)CRF小鼠內(nèi)分泌功能的影響。血清T3水平，Z組＞TC組（P＜0.001）、L

14、組＞P組（P＜0.001）。血清T4水平，Z組＞TC組（P=0.002）。正元膠囊能提高CRF小鼠血清T3、T4水平;提高化療后CRF小鼠血清T3水平。未發(fā)現(xiàn)正元膠囊對(duì)血清皮質(zhì)酮有影響。
　　結(jié)論:
　　1.CRF主要涉及脾、腎，與肺、肝相關(guān)，脾氣不足、腎精虧虛、痰瘀毒結(jié)可能是CRF的病機(jī)所在。正元膠囊能益氣健脾、補(bǔ)腎填精，兼軟堅(jiān)散結(jié)，可針對(duì)CRF的病機(jī)治療。
　　2.正元膠囊能緩解CRF小鼠的軀體性及精神性疲勞，從而