2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、非酒精性脂肪肝(NAFLD)在全球范圍內(nèi)廣泛流行,發(fā)病率呈不斷上升趨勢,且病因不明。為探討環(huán)境因素(壬基酚)和不良生活方式(高脂高糖飲食)在NAFLD發(fā)生發(fā)展過程中的作用,本課題分為兩部分開展實驗研究。第一部分,針對常規(guī)飼料喂養(yǎng)的SD大鼠,采用灌胃暴露壬基酚(NP)連續(xù)90天,研究NP在環(huán)境暴露濃度下是否可導致大鼠NAFLD發(fā)生;第二部分,針對高脂高糖飼料喂養(yǎng)的SD大鼠,采用NP連續(xù)90天灌胃,觀察SD大鼠在高脂高糖飲食與NP共同作用下

2、大鼠NAFLD發(fā)生情況,以及探討NP亞慢性暴露是否加重或促進高脂高糖飲食所致NAFLD的發(fā)生。并檢測與肝臟脂質(zhì)合成相關(guān)基因、蛋白的表達,初步闡明NP致NAFLD的機制。本研究分為兩個部分:
  第一部分:NP亞慢性暴露對肝臟及功能的影響。
  目的:探討NP亞慢性暴露是否誘發(fā)大鼠非酒精性脂肪肝形成。
  方法:40只清潔級SD大鼠(200±20)g,雌雄各半,購于第三軍醫(yī)大學大坪實驗動物中心(合格證號:(SCXK(渝)

3、2012-0005))適應性喂養(yǎng)7天后隨機分成4組,即對照組(玉米油),低劑量組(0.02μg/kg NP),中劑量組(0.2μg/kg NP),高劑量組(2μg/kg NP)。連續(xù)灌胃染毒90 d,灌胃期間每周稱量體重1次,記錄飲食量和飲水量。于第10周末每組大鼠隨機選取4只進行肝臟超聲檢測,90 d后10%的水合氯醛麻醉后剖殺大鼠,腹主動脈取血分離血清用于肝功和血脂檢測,稱量肝臟質(zhì)量并計算肝體指數(shù),每只大鼠取肝臟最大葉邊緣內(nèi)側(cè)1 m

4、m處組織3等份,1份固定于10%甲醛用于HE染色、其余2份組織凍存-80度用于實時熒光定量PCR檢測脂質(zhì)代謝相關(guān)基因Fas,Srebp1,Ucp2的表達量,Western blot檢測c/EBPα、PPARγ表達。
  結(jié)果:各NP暴露組體重,攝食和飲水無明顯差異(P>0.05)。超聲結(jié)果顯示,各組未見均未見明顯脂肪肝改變。HE染色發(fā)現(xiàn),僅高劑量NP組可見少量肝細胞脂肪變。肝功和血生化結(jié)果顯示,血清ALT,AST,TC,LDL-C

5、沒有增加(P>0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示,中,高劑量NP暴露組脂質(zhì)合成相關(guān)基因Fas,Ucp2,Srebp1 mRNA與對照組表達均上調(diào)(P<0.05)。Western blot結(jié)果顯示,中、高劑量組脂質(zhì)合成相關(guān)蛋白c/EBPα、PPARγ相對表達量明顯上調(diào)(P<0.05)。
  結(jié)論:低劑量NP亞慢性暴露未致大鼠非酒精性脂肪肝形成,但可上調(diào)部分肝臟脂質(zhì)合成代謝相關(guān)基因Fas,Ucp2,Srebp1和蛋白c/EBPα、PPA

6、Rγ的表達。
  第二部分:NP聯(lián)合高脂高糖飲食致大鼠非酒精性脂肪肝及機制研究。
  目的:探討NP亞慢性暴露是否加重高脂高糖飲食所致NAFLD的發(fā)生。
  方法:40只清潔級SD大鼠(200±20)g,雌雄各半,購于第三軍醫(yī)大學大坪實驗動物中心(合格證號:(SCXK(渝)2012-0005))適應性喂養(yǎng)(100%基礎(chǔ)飼料)7天后隨機分成4組,即高脂高糖飲食對照組(玉米油),高脂高糖飲食+NP低劑量組(0.02μg/k

7、g),高脂高糖飲食+NP中劑量組(0.2μg/kg),高脂高糖飲食+NP高劑量組(2μg/kg)。實驗期間每周稱重1次,記錄飲水、攝食量。第10周末每組隨機抽取4只大鼠進行肝臟彩色超聲檢查,出現(xiàn)強回聲區(qū)可判斷NAFLD模型建立成功。于第12周末對動物進行剖殺取材,10%的水合氯醛麻醉后,腹主動脈取血分離血清用于肝功和血脂檢測。稱量肝臟質(zhì)量并計算肝體指數(shù),每只大鼠取肝臟最大葉邊緣內(nèi)側(cè)1 mm處組織3等份,1份固定于10%甲醛用于HE染色、

8、其余2份組織凍存-80度用于實時熒光定量PCR檢測脂質(zhì)代謝相關(guān)基因Fas,Srebp1,Ucp2的表達量,Western blot檢測c/EBPα、PPARγ表達。
  結(jié)果:高脂高糖飲食對照及NP暴露全部發(fā)生脂肪肝,第12周高劑量組體重增加(P<0.05),低、中劑量NP暴露組飲水量,中、高劑量飲食量顯著高于對照組(P<0.05)。超聲結(jié)果顯示,各組均發(fā)現(xiàn)強回聲區(qū)域,提示有脂肪肝形成,且中,高劑量組回聲區(qū)強于對照組,高劑量組強于

9、低劑量組。HE染色發(fā)現(xiàn),NP暴露組隨劑量增加大泡性脂肪變肝細胞逐漸增多。肝功和血生化結(jié)果顯示,高劑量組ALT,AST,TC,LDL-C血清含量均增加,中劑量組TG,TC,LDL-C含量血清含量增加(P<0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示,各NP暴露組Fas,Ucp2 mRNA表達量上調(diào),中劑量Srebp1表達上調(diào)(P<0.05)。Western blot結(jié)果顯示,除低劑量NP暴露組PPARγ外,其余各組c/EBPα、PPARγ蛋白相對表達

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