miRNAs在急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎血漿中的表達意義及穿虎痛風(fēng)合劑對差異性miRNAs表達的干預(yù)作用研究.pdf

1、目的：運用microRNA基因芯片技術(shù)檢測急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者血漿中微小 RNA（microRNAs，miRNAs）的表達譜系，篩選其與正常人和無癥狀高尿酸血癥（HUA）患者血漿中差異性表達的miRNAs，對部分差異性 miRNAs進行熒光定量 PCR（RT-qPCR）驗證。同時研究穿虎痛風(fēng)合劑治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的臨床療效和對差異性miRNAs表達的干預(yù)作用，探討miRNAs在急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎中的作用機制，研究穿虎痛風(fēng)合劑治療急性痛風(fēng)

2、性關(guān)節(jié)炎的作用新靶點，為中醫(yī)藥防治急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎提供新的理論和試驗依據(jù)。
　　方法：⑴采集4例急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、4例無癥狀HUA和4例健康對照者的血漿，采用Trizol法提取RNA，運用exqion的LNATM miRNAs microarray高通量檢測篩選miRNAs的表達譜系，運用聚類分析軟件分析差異性表達的miRNAs。⑵采集60例急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎和30例無癥狀HUA的血漿，采用RT-qPCR方法對部分差異性表達的miR

3、NAs進行驗證。⑶采用隨機、雙盲、雙模擬、平行對照研究的方法，將189例急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者按隨機數(shù)字表法分為穿虎痛風(fēng)合劑組、秋水仙堿組和對照組，采集患者治療前、治療后5天及8周的血漿，運用RT-qPCR方法檢測部分差異性miRNAs，采用酶聯(lián)免疫吸附法測定趨化因子2（CCL2）和趨化因子8（CXCL8）水平，分析穿虎痛風(fēng)合劑對差異性表達miRNAs和趨化因子的干預(yù)作用。
　　結(jié)果：①急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者血漿中有20個miRNAs

4、呈差異性表達，其中表達明顯上調(diào)的有6個，分別為miR-3146、miR-4449、miR-4531、miR-3611、miR-652-5p和 miR-4654；表達下調(diào)的有14個，包括miR-451a、miR-223-3p、miR-4763-5p、miR-374b-5p、miR-106b-5p、miR-589-5p、miR-3907、miR-885-5p、miR-361-5p、miR-30c-5p、miR-151a-3p、miR-874

5、-5p、miR-299-5p和 miR-22-3p。②進一步行RT-qPCR驗證顯示，急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者血漿中 miR-223-3p、miR-885-5p和miR-374b-5p表達水平明顯特異性的低于無癥狀 HUA患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），與 miRNAs基因芯片結(jié)果相一致。③臨床試驗結(jié)果顯示，穿虎痛風(fēng)合劑組、秋水仙堿組和對照組患者的基線指標(biāo)無顯著差異（p>0.05）。三組治療5天后的差值比較，穿虎痛風(fēng)合劑和秋水仙堿

6、組在上調(diào)血漿 miR-223-3p、miR-374b-5p和降低關(guān)節(jié)疼痛、腫脹評分及血漿CCL2水平方面優(yōu)于對照組（p<0.05）；穿虎痛風(fēng)合劑在上調(diào)血漿miR-885-5水平及降低血漿CCL8水平方面優(yōu)于秋水仙堿組和對照組（p<0.05）。三組治療8周后的差值比較，穿虎痛風(fēng)合劑和秋水仙堿較對照組能更好的上調(diào)血漿 miR-223-3p、miR-374b-5p水平，穿虎痛風(fēng)合劑較秋水仙堿和對照組能更好的上調(diào)血漿miR-885-5p和降低血

7、尿酸水平（均p<0.05），同時穿虎痛風(fēng)合劑組谷丙轉(zhuǎn)氨酶、血肌酐水平較秋水仙堿組明顯下降（均p<0.05）。意向性分析顯示，穿虎痛風(fēng)合劑和秋水仙堿組較對照組能明顯降低急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的復(fù)發(fā)率（p<0.05）。④急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者的血漿miR-223-3p及miR-885-5p水平與其疼痛評分和C反應(yīng)蛋白（CRP）呈顯著負(fù)相關(guān)（p<0.05），而血漿miR-374b-5p水平與疼痛評分和血漿CCL2呈顯著負(fù)相關(guān)（p<0.05）。

8、　　結(jié)論：⑴急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎血漿中miR-3146、miR-4531等6個miRNAs表達上調(diào)，miR-223-3p、miR-374b-5p、miR-885-5p等14個miRNAs表達下調(diào)。20個差異性miRNAs可能在急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病中起重要作用。⑵血漿 miR-223-3p、miR-885-5p水平與急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)疼痛評分等反映炎癥嚴(yán)重程度的指標(biāo)相關(guān)，而血漿miR-374b-5p與CCL2密切相關(guān)，可能作為判斷病情