miRNAs在慢性痛風患者血漿中的表達及穿虎通痹合劑對差異性miRNAs表達的干預(yù)作用研究.pdf

1、目的：應(yīng)用microRNA基因芯片技術(shù)檢測慢性痛風性關(guān)節(jié)炎患者血漿中微小 RNA（microRNAs，miRNAs）的表達譜系，篩選其與正常人血漿中差異性表達的miRNAs，應(yīng)用熒光定量PCR（RT-qPCR）技術(shù)對部分差異性表達的miRNAs進行驗證分析。同時研究穿虎通痹合劑治療慢性痛風性關(guān)節(jié)炎的臨床療效和對差異性 miRNAs表達的干預(yù)作用，探討 miRNAs在慢性痛風中的作用機制，研究穿虎通痹合劑治療慢性痛風的作用新靶點，為中醫(yī)藥

2、防治慢性痛風提供新的臨床和分子學依據(jù)。
　　方法：⑴采集4例慢性痛風性關(guān)節(jié)炎和4例健康對照者的空腹血血漿，采用Trizol法提取RNA，運用exqion的LNATM miRNAs microarray高通量檢測篩選miRNAs的表達譜系，運用聚類分析軟件分析差異性表達的miRNAs。⑵擴大慢性痛風性關(guān)節(jié)炎患者樣本量至60例，擴大健康對照組的樣本量至30例，采用RT-qPCR方法對部分差異性表達的miRNAs進行驗證分析。⑶采用隨機

3、、雙盲、雙模擬、平行對照研究的方法，將195例慢性性痛風性關(guān)節(jié)炎患者按隨機數(shù)字表法分為穿虎通痹合劑組、別嘌醇組和對照組，采集患者治療前、治療后4周及8周的血漿，運用RT-qPCR方法檢測部分差異性miRNAs，采用酶聯(lián)免疫吸附法測定趨化因子2（CCL2）和趨化因子8（CXCL8）水平，分析穿虎通痹合劑對差異性表達miRNAs和趨化因子CCL2、CXCL8的干預(yù)作用。
　　結(jié)果：①慢性痛風性關(guān)節(jié)炎患者血漿中有48個miRNAs呈差異

4、性表達，其中表達明顯上調(diào)較對照組≥1.5倍的有36個，分別為 miR-502-5p、miR-4748、miR-4726-5p、miR-10a-3p、miR-302a-3p、miR-4251、miR-5580-5p、miR-639、miR-4764-5p、miR-631、miR-4531、miR-1284、miR-H8-5p、miR-198；、miR-4466、miR-874-3p、miR-5190、miR-205-3p、miR-204-

5、5p、miR-183-3p、miR-H1、miR-1471、miR-660-3p、miR-92a-2-5p、miR-1255a、miR-505-5p、miR-765、miR-4780、miR-4324、miR-4738-3p、miR-4800-5p、miR-B1-5p、miR-4455、miR-5004-3p、miR-4632-3p、miR-4634；表達下調(diào)較對照組≤1.5倍的有12個，包括miR-548l、miR-361-5p、mi

6、R-326、miR-151a-3p、miR-486-5p、miR-769-5p、miR-130b-3p、miR-423-3p、miR-4288、miR-4732-5p、miR-584-5p、miR-339-5p。②進一步行RT-qPCR驗證分析顯示，慢性痛風性關(guān)節(jié)炎患者血漿中miR-339-5p、miR-486-5p和 miR-361-5p表達水平明顯低于健康對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（p<0.05），與miRNAs基因芯片結(jié)果相一致。

7、③臨床試驗結(jié)果顯示，穿虎通痹合劑組、別嘌醇組和對照組患者的基線指標無顯著差異（p>0.05）。三組治療4周后的差值比較，穿虎通痹合劑和別嘌醇組在上調(diào)血漿miR-486-5p和miR-361-5p和降低血漿CCL2水平方面優(yōu)于對照組；穿虎通痹合劑在上調(diào)血漿miR-339-5p水平及降低血漿CCL8水平方面優(yōu)于別嘌醇組和對照組。三組治療8周后的差值比較，穿虎通痹合劑和別嘌醇組較對照組能更好的上調(diào)血漿 miR-486-5p和miR-361-5

8、p水平，穿虎通痹合劑較別嘌醇組和對照組能更好的上調(diào)血漿miR-339-5p和降低血尿酸水平。意向性分析顯示，穿虎通痹合劑和別嘌醇組較對照組能明顯降低慢性痛風性關(guān)節(jié)炎的急性發(fā)作率，而穿虎通痹合劑較別嘌醇副作用更少。④慢性痛風性關(guān)節(jié)炎患者的血漿miR-486-5p及miR-361-5p水平與其疼痛評分和C反應(yīng)蛋白（CRP）等呈顯著負相關(guān)。
　　結(jié)論：⑴慢性痛風性關(guān)節(jié)炎血漿中miR-502-5p、miR-4748等36個miRNAs表達

9、上調(diào)，miR-339-5p、miR-486-5p、miR-361-5p等12個miRNAs表達下調(diào)。48個差異性miRNAs可能在慢性痛風性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病中起重要作用。⑵血漿miR-486-5p及miR-361-5p水平與慢性痛風性關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)疼痛評分等反映炎癥嚴重程度的指標相關(guān)，可作為判斷病情和臨床轉(zhuǎn)歸的生物學指標。⑶穿虎通痹合劑治療慢性痛風性關(guān)節(jié)炎的臨床療效與別嘌醇組相當，它可能通過上調(diào)miR-339-5p、miR-486-5p、m