中空纖維液相微萃取-HPLC法測定比索洛爾血漿游離藥物濃度及蛋白結合率.pdf

1、目的：
　　 許多藥物進入體內可與血漿蛋白相結合，生成藥物-蛋白質復合物。與血漿蛋白結合的藥物暫時失去活性，不能參與分布、代謝和消除。只有藥物的游離型分子才能從血液向組織轉運，真正與藥理活性和毒副反應密切相關，藥物的療效往往取決于其游離型濃度。當游離型藥物隨著轉運和消除使其濃度降低時，一部分結合型藥物就轉變成游離型藥物，使血漿及作用部位在一定時間內保持一定的藥物濃度。血漿蛋白結合率是指血漿中的蛋白結合部分藥物所占總藥物量的百分率

2、，用于表征藥物與血漿蛋白的結合程度。血漿蛋白結合率影響藥物在體內的分布、代謝與排泄，從而影響其作用強度和作用時間，是藥代動力學研究中的重要參數之一。
　　 目前測定藥物游離濃度及血漿蛋白結合率的方法主要有兩種:平衡透析法及超濾法。平衡透析法操作繁瑣費時，且大量透析液的加入稀釋了血漿樣品，可能會破壞原有的藥物-蛋白結合平衡，使測定結果失真;超濾法較平衡透析法簡便省時，但也存在一定弊端，如分離過程中藥物蛋白結合平衡不穩(wěn)定，超濾管價格

3、昂貴，分析成本較高等。
　　 1999年，Pedersen-Bjergaard等首次提出了以中空纖維為載體的液相微萃取(Hollow fiber-protected liquid phase microextraction，HF-LPME)的樣品前處理技術。即以多孔的中空纖維為微萃取溶劑的載體，它集采樣、萃取和濃縮于一體，具有簡便、快捷、消耗有機溶劑少，對環(huán)境污染小，萃取效率高，較高的富集率和靈敏度，易于與高效液相色譜(HPLC

4、)和毛細管電泳(CE)聯(lián)用等諸多優(yōu)點。同時由于微萃取是在多孔的中空纖維腔中進行，并不與樣品溶液直接接觸，從而避免了萃取溶劑的損失;而且由于大分子、雜質等不能進入纖維孔，因此還具有突出的樣品凈化功能，適用于復雜基質樣品的直接分析。
　　 在本課題中，擬將中空纖維液相微萃取技術與高效液相色譜法結合，僅通過測定中空纖維腔內藥物濃度即可同時計算出血漿游離藥物濃度及總藥物濃度，以建立一種簡便、快速、靈敏度高的測定比索洛爾血漿游離藥物濃度及

5、血漿蛋白結合率的新方法。
　　 材料和方法：
　　 將中空纖維截成8cm小段，用丙酮超聲5min，清洗中空纖維表面的雜質。晾干揮去丙酮后將中空纖維浸泡在有機相（正辛醇）中5min，使其孔壁充滿有機相，用注射器向中空纖維腔內注入適量空氣，排空腔內多余的有機相。在腔內注入2mol·L-1接受相（甲酸）20μL后，用加熱鑷子封閉兩端。
　　 取血漿樣品500μL，加入玻璃小瓶中，再加入美托洛爾標準品溶液50μL，用磷酸

6、鹽緩沖液將供體相稀釋至5.0mL。將封好兩端的中空纖維彎曲為U形完全浸入供體相中，加入轉子，在轉速為700rpm，37℃條件下萃取。25min后取出中空纖維，剪開兩端，取10μL接受相進入HPLC分析。
　　 通過優(yōu)化中空纖維液相微萃取實驗中的接受相pH值、萃取時間、萃取轉速等條件，確定了測定比索洛爾的血漿樣本的前處理條件，分別建立用于測定比索洛爾血漿游離藥物濃度及總藥物濃度的標準曲線，利用中空纖維液相微萃取聯(lián)合高效液相色譜法(

7、HF-LPME-HPLC-FLD)測定比索洛爾在接受相中的藥物濃度，代入當日標準曲線計算出比索洛爾血漿游離藥物濃度及總藥物濃度，進而計算比索洛爾血漿蛋白結合率。
　　 結果：
　　 比索洛爾游離藥物濃度標準曲線在5-125ng.mL-1范圍內線性關系良好(r=0.999)，在低、中、高三種濃度下測得比索洛爾的血漿蛋白結合率分別為31.2％,32.0％，31.8％。
　　 結論：
　　 所建方法簡便快速，重