豬水腫病大腸桿菌毒力因子雞卵黃抗體制備及Stx2e基因LAMP方法建立.pdf

1、豬水腫病(ED)是由某些特定血清型產(chǎn)志賀樣毒素大腸桿菌(STEC)引起的斷奶仔豬的一種急性致死性傳染病。以眼瞼、胃壁等處水腫、共濟(jì)失調(diào)、驚厥和麻痹為特征。該病發(fā)病急、死亡快、病死率較高。該病主要通過消化道感染,因此針對其黏膜感染的特點(diǎn),研制有效的口服疫苗對該病的防治具有重要意義。
　　 本研究采用擠壓法制備大腸桿菌SLT-Ⅱe基因突變菌株(O139*)微膠囊,微囊產(chǎn)品的平均粒徑為2mm、包裹率為76％,并檢測了微膠囊的耐人工胃酸

2、能力、在人工腸液中的腸溶性以及口服安全性。結(jié)果顯示:微膠囊能耐受pH為1.6的人工胃液3h,在pH為6.8的人工腸液中順利崩解釋放。該微囊對仔豬安全,口服后仔豬的食欲、飲水、增重、精神狀態(tài)正常,無不良反應(yīng)。
　　 將9頭35日齡斷奶仔豬隨機(jī)分成3組,每組3只。分別用突變菌株O139*的微膠囊、突變菌株O139*的菌液和PBS口服免疫,每天1次,連續(xù)3d。用間接ELISA方法檢測仔豬血清中特異性IgG抗體及糞便中特異性sIgA抗體

3、水平。結(jié)果顯示,口服微囊組仔豬于免疫后第21d、28d,檢測到了抗O抗原的IgG抗體(P/N＞2);在免疫后第14d、21d、28d檢測到了抗F18ab菌毛蛋白的IgG抗體(P/N＞2);在免疫后的第7d檢測到了抗SLT-ⅡeA蛋白的IgG抗體(P/N＞2);針對SLT-ⅡeB蛋白的IgG與免疫前沒有明顯變化。口服微膠囊組仔豬于免疫后第7d、21d、28d,檢測到了抗SLT-ⅡeA蛋白的sIgA抗體(P/N＞2);在免疫的第14d、21

4、d檢測到了抗O抗原的sIgA抗體(P/N＞2);在免疫后的第7d檢測到了抗SLT-ⅡeB蛋白的slgA抗體(P/N＞2)?？诜航M仔豬于免疫后也檢測到了針對上述抗原的特異性IgG和sIgA,但抗體水平低于口服微囊組。沒有從對照組仔豬的血清和糞便中檢測到特異性IgG和sIgA。
　　 利用ELISA試劑盒檢測了免疫前后仔豬血清中IL-4、IL-10、IFN-γ的含量變化。結(jié)果顯示口服微囊組仔豬血清中IL-10顯著升高,免疫前21

5、9.95pg/mL,免疫后兩周達(dá)到354.65pg/mL:IL-4含量也有升高,免疫前58.146pg/mL,免疫后三周達(dá)到75.762pg/mL:IFN-γ變化不明顯。第3次免疫后21d,仍能從口服微膠囊組和口服菌液組仔豬的糞便樣品中檢出突變菌株。
　　 在最后一次免疫后28d,分別從口服微囊組和對照組隨機(jī)選擇1頭仔豬,經(jīng)耳靜脈注射0.8mlSLT-Ⅱe,微囊組仔豬只表現(xiàn)出短時間的不愿走動,食欲下降,24h后恢復(fù)正常。對照組仔

6、豬食欲廢絕,發(fā)熱,臥地不起。72h后剖殺實(shí)驗(yàn)豬,微囊組仔豬的組織器官無肉眼可見病理變化,對照組仔豬肝臟邊緣有壞死灶、肺臟呈纖維素樣病變、胃粘膜和膽囊出現(xiàn)水腫;組織學(xué)病理變化顯示胃黏膜下層水腫,肝變性、壞死,肺臟、腎臟、脾臟的血管壁通透性增強(qiáng)、紅細(xì)胞滲出。
　　 研究結(jié)果證明微囊對突變菌具有良好的抗胃液保護(hù)作用,使其在腸道內(nèi)釋放后產(chǎn)生了定植,進(jìn)一步誘導(dǎo)仔豬產(chǎn)生體液免疫、黏膜免疫,對免疫仔豬具有良好的免疫保護(hù)作用。該突變菌株可作為豬